免疫组化
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免疫组化（Immunohistochemistry，简称 IHC），又称免疫组织化学，是一种利用抗体与组织细胞中特定的抗原特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（如酶、荧光素等）显色，从而在显微镜下对组织切片内的特定成分进行定性、定位或定量研究的技术[1]。
IHC 是现代解剖病理学的核心工具，在肿瘤的鉴别诊断、分期、预后判断以及指导个体化治疗（精准医学）中发挥着不可替代的作用。
基本原理与步骤
免疫组化的核心在于“抗原-抗体复合物”的可视化。
- 样本制备： 通常使用福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）的组织切片。
- 抗原修复： 通过加热（HIER）或酶消化（PIER）破坏固定时形成的蛋白交联，暴露被掩盖的抗原决定簇。
- 封闭： 使用正常血清或 BSA 减少非特异性结合。
- 抗体孵育：
- 一抗： 针对目标蛋白的特异性抗体。
- 二抗： 针对一抗物种的标记抗体（通常带有 HRP 或 AP 酶）。
- 显色与复染： 常用 DAB 显色剂（产生棕色沉淀），并使用苏木精进行细胞核复染。
常用诊断标志物
根据肿瘤类型，病理医生会选择不同的抗体组合（Panel）：
| 应用领域 | 核心标志物 | 临床意义 |
|---|---|---|
| 上皮源性肿瘤 | CK (Pan-CK, CK7, CK20) | 区分癌与肉瘤，判断原发灶 (如 CK7+/CK20-) |
| 淋巴造血系统 | CD20 (B细胞), CD3 (T细胞) | 淋巴瘤的免疫分型 |
| 肿瘤增殖指数 | Ki-67 | 评估肿瘤生长速度及恶性程度 |
| 乳腺癌/胃癌 | HER2、ER、PR | 指导靶向治疗及内分泌治疗 |
| 免疫检查点 | PD-L1 (22C3, SP263) | 预测免疫检查点抑制剂的疗效 (TPS/CPS评分) |
| 肌源性肿瘤 | Desmin, MyoD1 | 诊断横纹肌肉瘤等间叶源性肿瘤 |
临床应用价值
- 恶性肿瘤的诊断： IHC 可以通过细胞分化相关的蛋白表达，确定肿瘤的组织学来源（如区分未分化癌与黑色素瘤）。
- 寻找原发灶： 对于转移性肿瘤，通过特定指标组合（如 TTF-1 提示肺，PSA 提示前列腺）追溯原发病灶。
- 药物靶点检测： 检测 HER2、EGFR 或 ALK 的表达，直接决定患者是否能使用相应的单克隆抗体或 TKI 药物。
- 分子分型： 例如乳腺癌根据 IHC 结果分为 Luminal A/B、HER2 阳性和三阴性，指导不同临床方案。
技术挑战与质控
作为精密实验，IHC 的结果受到多种因素影响：
- 冷缺血时间： 组织离体到固定的时间，影响抗原活性。
- 抗体效价： 一抗的浓度梯度需要根据克隆号（Clone）精确优化。
- 背景染色： 内源性酶干扰或冲洗不彻底会导致背景过深（DAB背景）。
参见
参考文献
- ↑ Ramos-Vara JA. Technical aspects of immunohistochemistry. Vet Pathol. 2005;42(4):405-426.