3 乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯免疫法）藥典標準
3.1 品名
3.1.1 中文名
3.1.2 漢語拼音
Yixing Ganyan Bingdu Biaomian KangyuanZhenduan Shijihe （Meilianmianyifa）
3.1.3 英文名
Diagnostic Kit for Hepatitis B Virus Surface Antigen （ELISA）
3.2 定義、組成及用途
本品系用乙型肝炎病毒表面抗體（抗-HBs）包被的微孔板和酶標記抗-HBs及其他試劑製成，應用雙抗體夾心酶聯免疫法原理檢測人血清或血漿中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）。
3.3 1 基本要求
生產和檢定用設施、原材料及輔料、水、器具、動物等應符合“凡例”的有關要求。
3.4 2 製造
3.4.1 2.1 專用原材料
3.4.1.1 2.1.1 抗-HBs
可使用HBsAg多克隆抗體或單克隆抗體，抗體的活性、純度應符合要求。
3.4.1.2 2.1.2 辣根過氧化物酶（或其他適宜標記的酶）
辣根過氧化物酶的RZ值應不低於3.0，其他標記用酶應符合相應的要求。
3.4.1.3 2.1.3 陽性對照用血清或血漿
3.4.1.4 2.1.4 陰性對照用血清或血漿
3.4.1.5 2.1.5 微孔板
CV（%）應不高於10%。
3.4.2 2.2 製備程序
3.4.2.1 2.2.1 包被抗體的純化
採用鹽析法、離子交換色譜法純化，亦可採用其他適宜的純化方法。抗體純度用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法或其他方法測定，純化後抗體的活性、純度應符合要求，於低溫下保存。
3.4.2.2 2.2.2 酶標記抗體的製備
抗體純化及鑑定方法同2.2.1項，採用常規過碘酸鈉－乙二醇法或其他適宜方法進行辣根過氧化物酶或其他酶標記，酶標記抗體的活性、純度應符合要求，加入適當保護劑後於低溫下保存。
3.4.2.3 2.2.3 包被抗體濃度和酶標記抗體濃度的選定
3.4.2.4 2.2.4 包被抗體板的製備
採用最佳包被濃度的抗體包被微孔板孔，經封閉、乾燥和密封等處理後，於2～8℃保存。對包被板須抽樣檢定，應符合3.1.1～3.1.4項和3.1.7項要求。
3.4.2.5 2.2.5 陽性對照
選用HBsAg爲陽性的人血清或血漿，經60℃、1小時處理後，除菌過濾，於2～8℃保存；也可採用重組蛋白抗原配製。
3.4.2.6 2.2.6 陰性對照
選用HBsAg爲陰性的5份以上人血清或血漿混合，經60℃、1小時處理後，除菌過濾，於2～8℃保存。
3.4.2.7 2.2.7 反應時間的設置
檢測過程中加入檢測樣本後反應時間應不低於60分鐘，加入酶結合物後反應時間應不低於30分鐘，加入顯色液後顯色時間應不低於30分鐘。
3.4.3 2.3 半成品檢定
按3.1項進行。
3.4.4 2.4 成品
3.4.4.1 2.4.1 分批
3.4.4.2 2.4.2 分裝與凍幹
應符合“生物製品分裝和凍幹規程”規定，分裝或凍幹後保存於2～8℃。
3.4.4.3 2.4.3 規格
應爲經批准的規格。
3.4.4.4 2.4.4 包裝
3.5 3 檢定
3.5.1 3.1 半成品檢定
3.5.1.1 3.1.1 陰性參考品符合率
用國家參考品或經國家參考品標化的參考品進行檢定，不得出現假陽性。
3.5.1.2 3.1.2 陽性參考品符合率
用國家參考品或經國家參考品標化的參考品進行檢定，檢測3份濃度值大於5×104IU/ml的HBsAg陽性參考品，不得出現假陰性。
3.5.1.3 3.1.3 最低檢出量
用國家參考品或經國家參考品標化的參考品進行檢定，HBsAg adr、adw及ay亞型的最低檢出量應符合要求。
3.5.1.4 3.1.4 精密性
用國家參考品或經國家參考品標化的參考品進行檢定，CV（%）應不高於15% （n=10）。
3.5.1.5 3.1.5 無菌檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ A）含有蛋白質成分的液體組分，半成品加防腐劑分裝後，對留樣進行無菌檢查，採用直接接種法，應符合規定。
3.5.1.6 3.1.6 水分
凍幹組分水分應不高於3.0%（2010年版藥典三部附錄Ⅶ D）。
3.5.1.7 3.1.7 穩定性試驗
試劑各組分於37℃放置至少3天（有效期爲6個月），應符合3.1.1～3.1.4項要求。
3.5.2 3.2 成品檢定
3.5.2.1 3.2.1 物理檢查
3.5.2.1.1 3.2.1.1 外觀
液體組分應澄清透明；凍幹組分應呈白色或棕色疏鬆體。
3.5.2.1.2 3.2.1.2 溶解時間
凍幹組分應在3分鐘內溶解。
3.5.2.2 3.2.2 陰性參考品符合率
按3.1.1項進行。
3.5.2.3 3.2.3 陽性參考品符合率
按3.1.2項進行。
3.5.2.4 3.2.4 最低檢出量
按3.1.3項進行。
3.5.2.5 3.2.5 精密性
按3.1.4項進行。
3.5.2.6 3.2.6 穩定性試驗
3.6 4 保存及有效期
3.7 5 使用說明
3.8 版本
《中華人民共和國藥典》2010年版