1 概述
HbF的抗鹼性及抗酸性都較正常血紅蛋白(HbA)爲強,因此,血片經酸洗脫後,含HbF的紅細胞因抗酸而不被脫色,能被伊紅染成紅色。含HbA或只含及少量HbF的紅細胞則被酸洗脫,僅留下紅細胞膜的空影。
3 血紅蛋白F細胞酸洗脫染色試驗的醫學檢查
3.1 檢查名稱
3.2 分類
3.3 取材
3.4 血紅蛋白F細胞酸洗脫染色試驗的測定原理
Hb F除抗鹼能力強外,抗酸能力也較Hb A爲強。因此,將血片在酸性緩衝液中浸洗後,只有含Hb F的紅細胞不被洗脫而染色。
3.5 試劑
(1)80% 乙醇固定液。
(2)0.1mol/L檸檬酸:取無水檸檬酸9.6g,溶解於少量蒸餾水中。待完全溶解後。加蒸餾水至500ml。
(3)0.2mol/L磷酸氫二鈉:取Na2HPO4·12H2O 35.81g溶於少量蒸餾水中,待完全溶解後,加水至500ml。
0.2mol/L磷酸氫二鈉 12.3ml
0.1mol/L檸檬酸 37.7ml
(5)蘇木素染色液:取1g蘇木素溶於10ml無水乙醇中,取2g明礬溶於200ml蒸餾水中,混合上述二液,煮沸後即加氧化汞0.5g,熱至染液變成深紫色,隨即放入冷水中,使之變涼,次日過濾。
3.6 操作方法
(1)按常規法制備血塗片,自然乾燥1h,再用80%乙醇固定5min(檸檬酸鹽抗凝血在4℃冰箱內保存3天可以使用),水洗待幹。
(2)將固定後血膜放37℃,pH3.3的磷酸鹽檸檬酸緩衝液中,保溫浸洗5min。
(3)沖洗乾燥後,在蘇木素染色液中染白細胞1min,以免誤認爲陽性紅細胞。
(4)水洗後,用伊紅染液染紅細胞1min,再水洗,幹後鏡檢。
(5)在油鏡下,含有Hb F的紅細胞被伊紅染液染成鮮紅色,爲陽性紅細胞;僅留下淡影的細胞膜爲陰性紅細胞。計數1000個紅細胞中陽性紅細胞所佔百分率。
3.7 正常值
着色細胞:0~<1%。
新生兒: 2/3。
3.8 化驗結果臨牀意義
(2)少數紅細胞染成紅色:β-地中海貧血輕症型、再生障礙性貧血、溶血性貧血。
(5)染色深淺不均勻:β-地中海貧血輕症型。
3.9 附註
(1)血片製成後,在2h內染色,否則可出現假陽性反應。要求塗片薄,細胞平鋪分散。
(2)緩衝液的pH、溫度、洗脫時間應嚴格控制,否則影響測定結果。
(3)也可用稀釋瑞氏染色液作對比染色。