2 基本信息
ICS 11.020
C 61
中華人民共和國衛生行業標準WS/T 635—2018《尿中砷形態測定 液相色譜-原子熒光法》（Determination of urinary arsenic speciation —liquid chromatography-atomic fluorescence spectrometry）由中華人民共和國國家衛生健康委員會於2018年09月17日《關於發佈推薦性衛生行業標準〈尿中砷形態測定 液相色譜-原子熒光法〉的通告》（國衛通〔2018〕17號）發佈，自2019年03月01日起實施。
3 發佈通知
關於發佈推薦性衛生行業標準《尿中砷形態測定 液相色譜-原子熒光法》的通告
國衛通〔2018〕17號
現發佈推薦性衛生行業標準《尿中砷形態測定 液相色譜-原子熒光法》，編號和名稱如下：
WS/T 635—2018 尿中砷形態測定 液相色譜-原子熒光法
該標準自2019年3月1日起施行。
特此通告。
國家衛生健康委員會2018年9月17日
4 前言
本標準按照 GB/T 1.1—2009 給出的規則起草。
本標準起草單位：北京市疾病預防控制中心、重慶市疾病預防控制中心、廣東省疾病預防控制中心、安徽省疾病預防控制中心、北京朝陽醫院、山西省疾病預防控制中心。
本標準主要起草人：劉麗萍、王小豔、張妮娜、張潔、王晶、韋瑩、李惠玲、郭舒崗、陳紹佔、戴銳睿。
5 標準正文
5.1 1 範圍
本標準規定了測定尿中砷形態（亞砷酸鹽[As（III）]、砷酸鹽[As（V）]、一甲基砷（MMA）和二甲基砷（DMA））的液相色譜-原子熒光法。
本標準適用於尿中砷形態（亞砷酸鹽[As（III）]、砷酸鹽[As（V）]、一甲基砷（MMA）和二甲基砷（DMA））的測定。
5.2 2 規範性引用文件
下列文件對本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用於本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用於本文件。
5.3 3 原理
尿樣按一定比例稀釋後，以液相色譜進行分離，分離後的目標化合物在酸性介質下與硼氫化鉀（KBH4）反應，生成氣態砷化合物，用原子熒光光譜儀進行測定，保留時間定性，以峯高或者峯面積繪製標準曲線法定量。
5.4 4 儀器
4.1 玻璃器皿均需以硝酸溶液（1+4）浸泡 24 h，用水反覆沖洗，最後用純水沖洗乾淨。
4.3 pH 計（精度 0.01）。
4.4 電子天平（感量 0.1 mg）。
4.5 超聲波清洗器。
4.6 離心機，轉速≥8000 r/min。
4.7 純水製備儀。
5.5 5 試劑
5.1 實驗用水及試劑要求：除非另有說明，本方法所用試劑均爲優級純，純水爲 GB/T 6682 規定的一級水。
5.2 鹽酸（HCl，ρ=1.19 g/mL）。
5.3 氫氧化鉀（KOH）。
5.4 硼氫化鉀（KBH4）。
5.5 磷酸氫二銨[(NH4)2HPO4]。
5.6 甲酸（HCOOH，99 %）。
5.7 標準物質：亞砷酸根（AsO33-），砷酸根（AsO43-），一甲基砷（CH4AsO3-），二甲基砷（C2H6AsO2-）均爲有證標準物質。
5.6 6 試劑配製
5.6.1 6.1 載流，鹽酸溶液（7+93）
量取 70 mL 鹽酸，用純水稀釋至 1000 mL。
5.6.2 6.2 還原劑（20 g/L 硼氫化鉀溶液-3.5 g/L 氫氧化鉀溶液）
稱取 3.5 g 氫氧化鉀溶解於 900 mL 純水中混勻，加入 20 g 硼氫化鉀，用純水稀釋至 1000 mL，混勻。
5.6.3 6.3 甲酸溶液（10+90）
量取 10 mL 甲酸用純水稀釋至 100 mL。
5.6.4 6.4 流動相（15 mmol/L 磷酸氫二銨溶液）
稱取 1.98 g 的磷酸氫二銨溶解於 1000 mL 純水中，用甲酸溶液（10+90）調節 pH 至 6.0，超聲脫氣5 min，備用。
5.6.5 6.5 砷形態標準溶液配製
6.5.1 砷形態標準儲備溶液[ρ(As)=10.0 mg/L]：分別準確稱取適量亞砷酸根、砷酸根、一甲基砷、二甲基砷四種砷形態標準物質，用純水配製成含砷濃度爲 10.0 mg/L 的砷形態單標標準儲備溶液，置於 4 ℃冰箱中保存。
6.5.2 砷形態混合標準溶液[ρ(As)=1.0 mg/L]：分別準確移取 10.0 mg/L 的四種砷形態單標標準儲備溶液1.00 mL 置於 10 mL 容量瓶中，用純水定容至刻度，現用現配。
6.5.3 砷形態混合標準使用系列溶液[ρ(As)=0～100.0 µg/L]：分別準確移取一定量的 1.0 mg/L 砷形態混合標準溶液，用純水逐級稀釋成 0.0 µg/L、2.0 µg/L、5.0 µg/L、10.0 µg/L、50.0 µg/L、100.0 µg/L 四種砷形態混合標準系列使用溶液，現用現配。
5.7 7 樣品收集、運輸和保存
收集不少於 10 mL 尿液，置於潔淨的聚丙烯塑料或玻璃試管中，嚴密封口以防蒸發。現場收集尿樣後，在 4 ℃下保存運輸；樣品應該儘快測定，在 4 ℃下可保存 30 d。
5.8 8 分析步驟
5.8.1 8.1 試樣的前處理
取 1mL 均勻的尿樣用純水稀釋 3 倍，用 0.45 µm 水系濾膜過濾後上機測定。如果尿樣中有沉澱，先將尿樣離心 10 min（8000 r/min），取一定量的上清液按以上方法測定。如果樣品中砷形態濃度超過標準曲線上限，則將尿樣按一定比例稀釋後測定。
5.8.2 8.2 液相色譜參考條件
8.2.1 色譜柱條件：陰離子交換色譜柱（柱長 250 mm，內徑 4.1 mm），或等效柱。陰離子交換色譜保護柱（柱長 25 mm，內徑 2.3 mm），或等效柱。
8.2.2 流動相組成：15 mmol/L 磷酸氫二銨溶液（pH=6.0）作爲流動相，1.0 mL/min 流速洗脫，進樣體積爲 100 µL。
5.8.3 8.3 原子熒光檢測參考條件
——光電倍增管負高壓：280 V；
——砷空心陰極燈總電流：90 mA；
——輔陰極燈電流：40 mA；
——原子化器溫度：中溫；
——氬載氣流量：300 mL/min；
——氬屏蔽氣流量：600 mL/min；
——還原劑：20 g/L 硼氫化鉀溶液-3.5 g/L 氫氧化鉀溶液；
5.8.4 8.4 標準曲線的測定
分別吸取 100 µL 四種砷形態的混合標準使用系列溶液，依次注入液相色譜-原子熒光光譜聯用儀進行分離及檢測，得到色譜圖，以保留時間定性。以標準系列溶液中砷形態的濃度爲橫座標，以色譜峯高或峯面積爲縱座標，繪製標準曲線。標準溶液色譜圖見附錄 A 中圖 A.1。
5.8.5 8.5 試樣溶液的測定
吸取 100 µL 試樣溶液注入液相色譜—原子熒光光譜聯用儀進行分析，得到色譜圖，以保留時間定性。根據標準曲線得到試樣溶液中砷形態的含量。試樣溶液色譜圖見圖 A.2。
5.9 9 分析結果的計算
尿樣中砷形態[As（III）、As(V)、MMA、DMA]的含量（以砷計）按式（1）計算:
Xi=（Ci- C0）·K ………………………（1）
式中：
Xi——尿樣中砷形態的含量（以砷計），單位爲微克每升（µg/L）；
Ci——由標準曲線查得的試樣溶液中砷形態的濃度（以砷計），單位爲微克每升（µg/L）；
C0——由標準曲線查得的現場空白中砷形態的濃度（以砷計），單位爲微克每升（µg/L）；
K——尿樣稀釋倍數。
5.10 10 方法特性
5.10.1 10.1 檢出限
本方法中亞砷酸鹽、一甲基砷、二甲基砷檢出限均爲 0.5 µg/L，定量限爲 1.5 µg/L；砷酸鹽檢出限爲 0.8 µg/L，定量限爲 2.4 µg/L。
5.10.2 10.2 精密度
6個實驗室對含砷形態爲6.0 μg/L～400.0 μg/L的尿樣進行6次重複測定，相對標準偏差均小於5.0%。
5.10.3 10.3 準確度
採用尿中砷形態成分標準物質及加標回收考察方法準確性，6 個實驗室測定的不同濃度的樣品加標回收率在 80%～120%之間。
5.11 11 質量保證和質量控制要點
11.1 實驗環境、器皿、試劑、採樣及運輸過程應避免砷污染。
11.2 每次樣品測定時均應配製和測定標準系列，標準曲線迴歸方程的相關係數絕對值應≥0.998。
