HLA 分型技术演变

HLA 分型技术演变

从血清学到高通量测序的分辨率提升
第一代	血清学 / 细胞学
第二代	PCR-SSP / PCR-SSO
第三代 (金标准)	SBT (Sanger 测序)
最新一代	NGS (高通量测序)

HLA 检测技术演进反映了临床医学对免疫识别精度需求的不断提升。从早期的仅能区分抗原类别（低分辨），发展到如今能精确读取碱基序列（高分辨），技术的迭代直接提高了器官移植的存活率和肿瘤免疫治疗的有效性。

目前，临床上根据需求不同，通过低、中、高三种分辨率的手段并存，但 NGS 技术正逐渐成为精准医疗的主流选择。

技术迭代路线图

HLA 分型技术经历了从蛋白质水平到基因水平，再到全基因组水平的三个阶段：

   血清学 (CDC)
   →
   PCR 分子法 (SSP/SSO)
   →
   SBT 测序
   →
   NGS 全长测序

各阶段技术客观评价

1. 血清学与细胞学方法 (已淘汰/辅助用)

早期主要利用微量淋巴细胞毒试验 (CDC)。

• 原理：利用抗原-抗体反应来判断 HLA 类型。
• 局限：只能达到“低分辨”水平（2位数字），无法区分基因亚型，且需要活细胞，样本保存困难。目前主要用于移植前的最终交叉配型，而非定型。

2. PCR 分子生物学方法 (SSP/SSO)

随着 PCR 技术的普及，基于 DNA 的分型成为主流。

• PCR-SSP (序列特异性引物)：引物特异性扩增，扩增出来即阳性。速度极快，适合急诊器官移植（如尸体肾移植）。
• PCR-SSO (序列特异性寡核苷酸探针)：适合大规模样本初筛（如骨髓库入库）。
• 客观评价：虽然比血清学准，但通常只能达到“中低分辨”，无法解决相位模糊（Phase Ambiguity）问题。

3. SBT 直接测序法 (曾经的金标准)

基于 Sanger 测序原理的 Sequence-Based Typing。

• 优势：可以直接读取外显子序列，达到“高分辨”（4位数字）。
• 缺陷：由于 Sanger 测序读长限制，且双链同时测序，常常出现“模棱两可”的碱基读取，需要依靠软件推测，无法覆盖内含子信息。

4. NGS 高通量测序 (当前前沿)

利用边合成边测序（SBS）或单分子测序技术。

• 优势：
  • 超高分辨：可提供 6-8 位甚至全基因组序列。
  • 全覆盖：覆盖全长基因（含内含子和非翻译区），彻底解决了等位基因模棱两可的问题。
  • 通量大：一次可检测数千个样本。
• 挑战：实验周期相对 PCR 方法较长，数据分析对生物信息学算法要求极高。

技术参数对比

主流 HLA 分型技术客观参数对比

技术指标	PCR-SSP	PCR-SBT	NGS
分辨率	低-中分辨 (2位)	高分辨 (4位)	超高分辨 (6-8位)
检测通量	低 (单样本)	中	极高
相位模糊	无法解决	部分存在	彻底解决
适用场景	急诊移植配型	常规临床确诊	骨髓库详查、肿瘤疫苗研发

参考文献

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