1 拼音
huà zhuāng pǐn zhōng fū nán xiāng dòu sù lèi （sān jiǎ shā lín 、8-jiǎ yǎng jī bǔ gǔ zhī sù 、5-jiǎ yǎng jī bǔ gǔ zhī sù ）hé ōu qián hú nèi zhǐ de jiǎn cè fāng fǎ
《化妝品中呋喃香豆素類（三甲沙林、8-甲氧基補骨脂素、5-甲氧基補骨脂素）和歐前胡內酯的檢測方法》由國家食品藥品監督管理局於2012年1月18日國食藥監保化[2012]13號發佈。
3 2 方法提要
樣品在經過提取後，用高效液相色譜儀分離，二極管陣列檢測器檢測，經與平行操作的三甲沙林、8-甲氧基補骨脂素、5-甲氧基補骨脂素和歐前胡內酯對照品比較，以保留時間和紫外光譜圖定性，峯面積定量，以標準曲線法計算含量。必要時，採用液相色譜-質譜方法（LC-MS/MS）進行確證。本方法對三甲沙林、8-甲氧基補骨脂素、5-甲氧基補骨脂素和歐前胡內酯的檢出限、定量限和取樣品0.5 g時的檢出濃度、定量濃度見表1。
4 3試劑和材料
3.1 甲醇，色譜純。
3.2 三甲沙林，純度≥99%。
3.3 8-甲氧基補骨脂素，純度≥98%。
3.4 5-甲氧基補骨脂素，純度≥99%。
3.5 歐前胡內酯，純度≥99%。
3.6 混合標準儲備溶液 [ （待測成分）=10 μg/mL]：分別稱取三甲沙林（3.2）、8-甲氧基補骨脂素（3.3）、5-甲氧基補骨脂素（3.4）和歐前胡內酯（3.5）對照品各5 mg（精確到0.1 mg），置5 mL量瓶中，用甲醇（3.1）溶解並稀釋至刻度，搖勻，配置成質量濃度各爲1 mg/mL的標準溶液。精密量取各標準溶液0.5 mL置50 mL量瓶中，加甲醇（3.1）稀釋至刻度，搖勻，即得10 μg/ mL的混合標準儲備溶液。
3.7 系列濃度標準溶液：精密量取一定體積的混合標準儲備溶液（3.6），置10 mL量瓶中，加甲醇（3.1）稀釋至刻度，配製得各待測成分的質量濃度分別爲0.05 μg/ mL、0.1 μg/ mL、0.5 μg/ mL、1.0 μg/ mL、5.0 μg/ mL、10.0 μg/ mL的系列濃度標準溶液。
5 4 儀器
4.1 高效液相色譜儀：具二極管陣列檢測器。
4.2 液相色譜-三重串聯四級杆質譜聯用儀。
4.3 分析天平：感量爲0.1 mg。
4.4 移液器。
4.5 渦旋振盪器。
4.7 高速離心機：轉速不小於10000 r/min。
6 5 測定步驟
5.1 樣品預處理
膏、霜、乳類：稱取0.5 g（精確至0.1 mg）樣品，置10 mL量瓶中，加6 mL甲醇（3.1），渦旋振盪使試樣與提取溶劑充分混勻，超聲提取20 min，放至室溫，加甲醇（3.1）稀釋至刻度，搖勻，轉移至10 mL具塞塑料離心管中，以12000 r/min離心5 min，上清液經0.45 μm濾膜過濾，濾液作爲待測溶液備用。
液體類：稱取0.5 g（精確至0.1 mg）樣品，置10 mL量瓶中，加甲醇（3.1）稀釋至刻度，混勻，必要時，轉移至10 mL具塞塑料離心管中，以12000 r/min離心5 min，上清液經0.45 μm濾膜過濾，濾液作爲待測溶液備用。
固體粉類：稱取0.5 g（精確至0.1 mg）樣品，置10 mL量瓶中，加8 mL甲醇（3.1），混勻，超聲提取20 min，放至室溫，加甲醇（3.1）稀釋至刻度，搖勻，靜置，必要時，轉移至10 mL具塞塑料離心管中，以12000 r/min離心5 min，上清液經0.45 μm濾膜過濾，濾液作爲待測溶液備用。
若樣品中被測成分的濃度超過了線性範圍的上限，需對待測溶液進行適當稀釋處理。
5.2 高效液相色譜參考條件
色譜柱：C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，以十八烷基硅烷鍵合硅膠爲填充劑）或具有同等柱效的色譜柱。
時間/min | 0 | 15 | 16 | 19 | 20 |
甲醇＋水 | 70＋30 | 90＋10 | 100＋0 | 100＋0 | 70＋30 |
注：梯度洗脫條件，操作者可根據樣品的不同選擇最佳條件，使待測成分與其他組分峯獲得完全分離。
流速：1.0 mL/min。
檢測波長：248 nm。
柱溫：30℃。
進樣量：10 μL。
5.3 樣品測定
按設定的色譜條件（5.2），取系列濃度標準溶液（3.7）分別進樣，進行高效液相色譜分析，以系列濃度標準溶液質量濃度爲橫座標，峯面積爲縱座標，進行線性迴歸，建立標準曲線，得到迴歸方程。取待測溶液（5.1）進樣10 μL分析，色譜圖檢出的成分，經與該成分的保留時間和紫外光譜圖比較確證後，根據待測成分的峯面積，代入迴歸方程計算待測成分的濃度。按“6”項下計算公式計算化妝品樣品中呋喃香豆素類成分的質量分數。
5.4 平行試驗
按以上步驟操作，對同一樣品獨立進行測定，獲得的兩次獨立測試結果的絕對差值不得超過算數平均值的10%。
5.5 陽性結果確證
在相同的實驗條件下，如果樣品中檢出的色譜峯的保留時間和紫外光譜圖與標準溶液中對應成分一致，所選擇的監測離子對的相對丰度比與相當濃度標準溶液的離子相對丰度比的偏差不超過表3規定範圍，則可以判定樣品中存在對應的待測成分。
相對離子丰度（k） | k≥50% | 50%＞k≥20% | 20%＞k≥10% | k≤10% |
最大允許偏差 | ±20% | ±25% | ±30% | ±50% |
液相色譜-質譜（LC/MS）參考條件：
色譜參考條件：
同前。
質譜參考條件：
離子源電壓（IS）：4500V。
碰撞氣（CAD）、氣簾氣（CUR）、霧化氣（GS1）、輔助氣2（GS2）均爲高純氮氣，使用前調節各氣流流量以使質譜靈敏度達到檢測要求。4種呋喃香豆素類成分的定性離子對和去簇電壓（DP）、碰撞能量（CE）等電壓值的設定參考值見表4。在以上色譜、質譜條件下，待測成分的定性離子及丰度比見表5。
