1 拼音
huà zhuāng pǐn zhōng bǔ gǔ zhī tè zhēng chéng fēn bǔ gǔ zhī sù 、yì bǔ gǔ zhī sù 、xīn bǔ gǔ zhī yì huáng tóng hé bǔ gǔ zhī èr qīng huáng tóng de jiǎn cè fāng fǎ
《化妝品中補骨脂特徵成分補骨脂素、異補骨脂素、新補骨脂異黃酮和補骨脂二氫黃酮的檢測方法》由國家食品藥品監督管理局於2012年1月18日國食藥監保化[2012]13號發佈。
3 2 方法提要
樣品在經過提取後，經高效液相色譜儀分離，二極管陣列檢測器檢測，經與平行操作的補骨脂素、異補骨脂素、新補骨脂異黃酮和補骨脂二氫黃酮對照品及補骨脂對照藥材比較，以保留時間和紫外光譜圖定性，鑑別補骨脂特徵成分補骨脂素、異補骨脂素、新補骨脂異黃酮和補骨脂二氫黃酮的存在。本方法對補骨脂素、異補骨脂素、新補骨脂異黃酮和補骨脂二氫黃酮的檢出限和取樣品0.5 g時的檢出濃度見表1。
4 3 試劑和材料
3.1 乙腈，色譜純。
3.2 補骨脂素，純度≥99%。
3.3 異補骨脂素，純度≥99%。
3.4 新補骨脂異黃酮，純度≥98%。
3.6 補骨脂，中國食品藥品檢定研究院，供鑑別用。
3.7 補骨脂特徵性成分混合標準溶液（ =0.1 μg/mL）：分別稱取補骨脂素（3.2）、異補骨脂素（3.3）、新補骨脂異黃酮（3.4）、補骨脂二氫黃酮（3.5）對照品各5 mg（精確到0.1 mg），置500 mL量瓶中，用甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，配製成質量濃度各爲10 μg/mL的標準溶液。精密量取各標準溶液0.1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得0.1 μg/mL的混合標準溶液。
3.8 補骨脂標準儲備溶液：取補骨脂對照藥材0.2 g，置50 mL三角瓶中，加30 mL 70%乙醇迴流提取1h，濾過，濾液置100 mL量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
6 5 測定步驟
5.1 樣品預處理
膏、霜、乳類：稱取0.5 g（精確至0.1 mg）樣品，置10 mL量瓶中，加6 mL甲醇，渦旋振盪使試樣與提取溶劑充分混勻，超聲提取20 min，放至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，轉移至10 mL具塞塑料離心管中，以12000 r/min離心5 min，上清液經0.45 μm濾膜過濾，濾液作爲待測溶液備用。
液體類：稱取0.5 g（精確至0.1 mg）樣品，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，混勻，必要時，轉移至10 mL具塞塑料離心管中，以12000 r/min離心5 min，上清液經0.45 μm濾膜過濾，濾液作爲待測溶液備用。
固體粉類：稱取0.5 g（精確至0.1 mg）樣品，置10 mL量瓶中，加8 mL甲醇，混勻，超聲提取20 min，放至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，靜置，必要時，轉移至10 mL具塞塑料離心管中，以12000 r/min離心5 min，上清液經0.45 μm濾膜過濾，濾液作爲待測溶液備用。
5.2 高效液相色譜參考條件
色譜柱：C18柱（100 mm×4.6 mm，3 μm，以十八烷基硅烷鍵合硅膠爲填充劑）或具有同等柱效的色譜柱；
流動相：乙腈＋0.1%醋酸水溶液，梯度洗脫，洗脫程序見表1。
注：梯度洗脫條件，操作者可根據樣品的不同選擇最佳條件，使4種成分與其他組分峯獲得完全分離。
流速：1.0 mL/min。
檢測波長：246 nm。
柱溫：30℃。
進樣量：10 μL。
5.3 樣品測定
按設定的色譜條件（5.2），取補骨脂特徵性成分混合標準溶液（3.7）進樣，進行高效液相色譜分析，記錄各色譜峯相應的保留時間和紫外光譜圖；取補骨脂標準儲備溶液（3.8）進行高效液相色譜分析，記錄各色譜峯相應的保留時間和紫外光譜圖。取待測溶液（5.1）進樣10 μL分析，若樣品色譜圖中，在與補骨脂特徵性成分--補骨脂素、異補骨脂素、新補骨脂異黃酮和補骨脂二氫黃酮對照品相應保留時間處有相同色譜峯出現，且具有相同的紫外光譜，則可以定性鑑別補骨脂特徵性成分補骨脂素、異補骨脂素、新補骨脂異黃酮和補骨脂二氫黃酮的存在。
5.4 平行試驗
按以上步驟操作，對同一樣品獨立進行測定，獲得的兩次獨立測試的色譜峯保留時間不得超過±1 min。
5.5 陽性結果確證
測定過程中若補骨脂素和異補骨脂素檢出陽性結果，而新補骨脂異黃酮和補骨脂二氫黃酮低於檢出限，可適當富集樣品對新補骨脂異黃酮和補骨脂二氫黃酮的檢測進一步確證。
