4 尿碱性磷酸酶的医学检查
4.1 检查名称
4.2 分类
4.3 化验取材
4.4 尿碱性磷酸酶的测定原理
ALP在碱性条件下使磷酸苯二钠水解,生成磷酸和游离酚,后者与4-氨基安替比林作用,并经铁氰化钾氧化成红色醌类化合物,其颜色的深浅与ALP活性成正比。
4.5 试剂
(1)0.1mol/L碳酸盐缓冲液(pH 10.0):称取无水碳酸钠6.36 g,碳酸氢钠3.36g,4-氨基安替比林1.5g,溶于800ml蒸馏水中,移入1000ml容量瓶内,加蒸馏水至刻度,置棕色瓶内保存。
(2)20mmol/L磷酸苯二钠溶液:称取磷酸苯二钠(AR)2.18g,迅速加入已煮沸的500ml蒸馏水中,冷却后加入氯仿2ml防腐,冰箱保存。此为基质液。
(3)铁氰化钾溶液:称取铁氰化钾2.5g,硼酸17g,分别溶于400ml蒸馏水中,混合后加水至1000ml,置棕色瓶内避光保存。出现蓝绿色应弃去。
(4)酚标准贮存液(1mg/ml):称取重蒸馏酚1.0g,溶于0.1mol/L盐酸中,并加至1000ml刻度。也可购买标准液。
(5)酚标准应用液(0.05mg/ml):取酚标准贮存液5ml,加蒸馏水至100ml。
4.6 操作方法
(1)比色法:按表1操作。
充分混匀,在510nm处,以蒸馏水调零,记录各管吸光度,以测定管与对照管吸光度差值,查标准曲线。
(2)连续监测法:各实验室可根据分析仪型号及操作介绍而定,主要参数:温育时间30s,连续监测时间60s,波长405nm,吸液量500μl,温度37℃,标本与试剂体积之比1∶50,系数2757。
4.7 正常值
(4.24±1.62)u/(g·cr)。
4.8 化验结果临床意义
升高:常见于肾小球滤过功能障碍、肾小管上皮细胞坏死(如急性肾小管坏死)、急性肾小管肾炎、狼疮肾炎、肾盂肾炎、肾缺血及肾癌、肾移植术后排斥反应等。并可作为药物性肾损伤的早期诊断指标。
4.9 附注
(1)磷酸苯二钠保存过程中避免其分解,每次配制试剂的蒸馏水要煮沸消毒,冷后加氯仿,冰箱保存,临用前倒出所需用量,多余试剂不可倒回瓶中。可保存1个月。
(2)加试剂顺序不能颠倒。
(3)常用试剂空白代替血清对照管,试剂空白管可以检查底物是否分解,当吸光度增高呈红色时,底物就不应使用。当血清严重溶血和黄疸时,可做一血清对照。