3 概述
甲狀腺素以遊離形式釋放人血液循環中,並迅速與血漿甲狀腺結合球蛋白(TBG)、清蛋白、甲狀腺結合前清蛋白相結合,僅0.03%呈遊離狀態。血漿甲狀腺結合球蛋白濃度及其結合力改變(如妊娠、哺乳、肝硬化、腎病綜合徵等),可使遊離甲狀腺素濃度發生變化。血清遊離甲狀腺素是甲狀腺功能體外試驗的靈敏指標,即使在生理及病理情況下引起血漿甲狀腺結合球蛋白結合力和濃度改變時,也能較準確反映甲狀腺的功能。
5 遊離甲狀腺素的醫學檢查
5.1 檢查名稱
5.2 分類
5.3 取材
5.4 遊離甲狀腺素的測定原理
血清中的FT4經透析至緩衝液中,而和蛋白質結合的T4仍留在透析袋內。取透析緩衝液和125I-T4混合,再加抗體。反應平衡後加入分離劑將125I-T4和125I-T4-抗體複合物分離。測量125I-T4-抗體複合物的放射性,從標準曲線上查得血清中FT4濃度。
5.5 試劑
(1)透析緩衝液:取AR級Na2HPO413.12g,KH2PO43.1g,EDTA·Na27.5g,明膠2g溶於1500ml蒸餾水中,用0.5mol/L NaOH調至pH7.4,加蒸餾水至2000ml,放4℃冰箱可保存1個月。臨用前取100ml,加磷酸四環素2mg。
(2)抗血清:製備方法同上法,臨用前用緩衝液稀釋至工作液滴度。
(3)標準T4貯存液(1μmol/L)。
(4)標準T4工作液:取貯存標準液,用透析緩衝液稀釋至1.0,2.5,10,50,200pmol/L。臨用前配製。
(5)125I-T4工作液:取125I-T4,用透析緩衝液稀釋至50μl中約10000cpm。
(6)分離劑:取100目活性炭2g,右旋糖苷T700.2g,BSA0.2g,加至100ml透析緩衝液中,置磁力攪拌20min,放4℃冰箱保存。
5.6 操作方法
(1)將8mm×40mm透析袋預先用0.1mol/L硝酸浸泡24h,經蒸餾水沖洗至中性。
(2)將透析袋一端用塑夾固定,取待測血清0.5ml加入透析袋中。
(4)將已裝入血清的透析袋疊成U字形,放入裝有透析緩衝液的瓶中。將透析袋兩端留在瓶口,裝血清部位完全浸於液體中。瓶口加一橡皮塞固定透析袋。
(5)將瓶固定於特製的架上。放37℃培養箱中振盪透析16~24h。取出透析袋,保留瓶中透析液待測。
(6)取10mm×75mm塑料管,按表1加入樣品和試劑。
(7)加入分離劑後混勻,放4℃20min,離心(3500r/min 4℃)15min。將上清傾出至另一塑料管中,在自動γ免疫計數器上測量。
(8)以B/B0%對標準液濃度繪製標準曲線。從標準曲線上直接得出血清FT4濃度。
5.7 正常值
10.3~25.8pmol/L。
5.8 化驗結果臨牀意義
降低:見於甲狀腺功能減退症。
升高:見於甲狀腺功能亢進症。
5.9 附註
(1)使用肝素可使遊離甲狀腺素水平升高;使用鋰鹽可使遊離甲狀腺素水平降低。
(2)遊離甲狀腺素測定的臨牀意義同血清甲狀腺素測定,但更敏感,且不受結合蛋白的影響。