查看“微滴数字PCR”的源代码

<div style="padding: 0 4%; line-height: 1.8; color: #1e293b; font-family: 'Helvetica Neue', Helvetica, 'PingFang SC', Arial, sans-serif; background-color: #ffffff; max-width: 1200px; margin: auto;">

    <div style="margin-bottom: 30px; border-bottom: 1.2px solid #e2e8f0; padding-bottom: 25px;">
        <p style="font-size: 1.1em; margin: 10px 0; color: #334155; text-align: justify;">
            <strong>[[微滴数字PCR]] (Droplet Digital PCR, ddPCR)</strong> 是一种基于<strong>[[微流控技术]]</strong>的第三代 PCR 技术。它通过将微量的 DNA 反应体系物理分割成成千上万个纳升级的油包水微滴（Droplets），使每个微滴作为一个独立的 PCR 反应器进行扩增。反应结束后，系统对每个微滴进行“有/无”荧光信号的二元计数（0 或 1），最后利用 <strong>[[泊松分布]] (Poisson Distribution)</strong> 统计学原理计算出靶分子的<strong>[[绝对拷贝数]]</strong>。与传统的 <strong>[[qPCR]]</strong> 相比，ddPCR 无需标准曲线即可实现绝对定量，且在检测<strong>[[稀有突变]]</strong>、<strong>[[拷贝数变异]] (CNV)</strong> 及抗抑制能力方面具有显著优势，是目前<strong>[[液体活检]]</strong>领域的金标准技术之一。
        </p>
    </div>

    <div class="medical-infobox mw-collapsible mw-collapsed" style="width: 320px; float: right; margin: 0 0 25px 25px; border: 1.2px solid #bae6fd; border-radius: 12px; background-color: #ffffff; box-shadow: 0 8px 20px rgba(0,0,0,0.05); overflow: hidden;">
        
        <div style="padding: 15px; color: #1e40af; background: linear-gradient(135deg, #e0f2fe 0%, #bae6fd 100%); text-align: center; cursor: pointer;">
            <div style="font-size: 1.2em; font-weight: bold; letter-spacing: 1.2px;">微滴数字PCR</div>
            <div style="font-size: 0.7em; opacity: 0.85; margin-top: 4px; white-space: nowrap;">Third-Generation PCR Technology · 点击展开</div>
        </div>
        
        <div class="mw-collapsible-content">
            <div style="padding: 25px; text-align: center; background-color: #f8fafc;">
                <div style="display: inline-block; background: #ffffff; border: 1px solid #e2e8f0; border-radius: 12px; padding: 20px; box-shadow: 0 4px 10px rgba(0,0,0,0.04);">
                     <div style="width: 140px; height: 90px; background-color: #f1f5f9; display: flex; align-items: center; justify-content: center; color: #94a3b8; font-size: 0.8em; padding: 10px; text-align: center;">Conceptual Model:<br>Sample Partitioning<br>20,000 Droplets</div>
                </div>
                <div style="font-size: 0.8em; color: #64748b; margin-top: 12px; font-weight: 600;">核心原理：分割-扩增-泊松统计</div>
            </div>

            <table style="width: 100%; border-spacing: 0; border-collapse: collapse; font-size: 0.85em;">
                <tr>
                    <th style="text-align: left; padding: 8px 12px; background-color: #f1f5f9; color: #475569; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; width: 40%;">技术代系</th>
                    <td style="padding: 8px 12px; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; color: #0f172a;">第三代 PCR</td>
                </tr>
                <tr>
                    <th style="text-align: left; padding: 8px 12px; background-color: #f1f5f9; color: #475569; border-bottom: 1px solid #e2e8f0;">定量模式</th>
                    <td style="padding: 8px 12px; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; color: #1e40af;">[[绝对定量]] (Copies/µL)</td>
                </tr>
                <tr>
                    <th style="text-align: left; padding: 8px 12px; background-color: #f1f5f9; color: #475569; border-bottom: 1px solid #e2e8f0;">检测下限 (LOD)</th>
                    <td style="padding: 8px 12px; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; color: #1e40af;">0.001% - 0.01% VAF</td>
                </tr>
                <tr>
                    <th style="text-align: left; padding: 8px 12px; background-color: #f1f5f9; color: #475569; border-bottom: 1px solid #e2e8f0;">关键耗材</th>
                    <td style="padding: 8px 12px; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; color: #0f172a;">微滴生成油 / 芯片</td>
                </tr>
                <tr>
                    <th style="text-align: left; padding: 8px 12px; background-color: #f1f5f9; color: #475569; border-bottom: 1px solid #e2e8f0;">核心优势</th>
                    <td style="padding: 8px 12px; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; color: #0f172a;">无需标准曲线 / 抗干扰</td>
                </tr>
                <tr>
                    <th style="text-align: left; padding: 8px 12px; background-color: #f1f5f9; color: #475569;">主要应用</th>
                    <td style="padding: 8px 12px; color: #1e40af;">[[液体活检]] / [[基因治疗QC]]</td>
                </tr>
            </table>
        </div>
    </div>

    <h2 style="background: #f1f5f9; color: #0f172a; padding: 10px 18px; border-radius: 0 6px 6px 0; font-size: 1.25em; margin-top: 40px; border-left: 6px solid #0f172a; font-weight: bold;">技术原理：数字化分割与泊松统计</h2>
    
    <p style="margin: 15px 0; text-align: justify;">
        ddPCR 的工作流程可以概括为“分而治之，统计为王”，主要包含三个步骤：
    </p>
    <ul style="padding-left: 25px; color: #334155;">
        <li style="margin-bottom: 12px;"><strong>微滴生成 (Droplet Generation)：</strong> 利用油包水技术，将 20 µL 的 PCR 反应体系物理分割成约 20,000 个均一的纳升（nL）级微滴。根据概率论，此时稀有的靶分子被随机分配到这些微滴中，大多数微滴可能只含有 0 个或 1 个靶分子。</li>
        <li style="margin-bottom: 12px;"><strong>PCR 扩增 (Amplification)：</strong> 微滴在普通 PCR 仪上进行热循环扩增。ddPCR 属于<strong>[[终点法PCR]]</strong>，不需要实时监测荧光，扩增结束后，含有靶分子的微滴发出强荧光（阳性，1），不含靶分子的微滴无荧光（阴性，0）。</li>
        <li style="margin-bottom: 12px;"><strong>信号读取与分析：</strong> 阅读仪逐个检测微滴的荧光信号。系统根据阳性微滴的比例，利用 <strong>[[泊松分布]]</strong> 公式 $P(x=0) = e^{-\lambda}$ 校正“多靶分子共处一滴”的概率，直接计算出样本中的起始拷贝数浓度。</li>
    </ul>

    <h2 style="background: #f1f5f9; color: #0f172a; padding: 10px 18px; border-radius: 0 6px 6px 0; font-size: 1.25em; margin-top: 40px; border-left: 6px solid #0f172a; font-weight: bold;">技术对比：qPCR vs. ddPCR</h2>

    <div style="overflow-x: auto; margin: 30px auto; max-width: 95%;">
        <table style="width: 100%; border-collapse: collapse; border: 1.2px solid #cbd5e1; font-size: 0.92em; text-align: left;">
            <tr style="background-color: #f8fafc; border-bottom: 2px solid #0f172a;">
                <th style="padding: 12px; border: 1px solid #cbd5e1; color: #0f172a; width: 20%;">特性维度</th>
                <th style="padding: 12px; border: 1px solid #cbd5e1; color: #475569;">实时荧光定量 PCR (qPCR)</th>
                <th style="padding: 12px; border: 1px solid #cbd5e1; color: #1e40af;">微滴数字 PCR (ddPCR)</th>
            </tr>
            <tr>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1; font-weight: 600;">信号类型</td>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1;">模拟信号 (Analog) - 连续的荧光强度曲线 (Ct值)。</td>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1;">数字信号 (Digital) - 二进制的 0 和 1 计数。</td>
            </tr>
            <tr>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1; font-weight: 600;">定量方式</td>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1;"><strong>[[相对定量]]</strong>，必须依赖标准曲线，易受扩增效率影响。</td>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1;"><strong>[[绝对定量]]</strong>，无需标准曲线，不受扩增效率微小波动的干扰。</td>
            </tr>
            <tr>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1; font-weight: 600;">灵敏度</td>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1;">通常只能检测 >1% 的突变丰度，背景噪音高。</td>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1;">极高，可检测 <strong>0.001%</strong> 的痕量突变，适合液体活检。</td>
            </tr>
            <tr>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1; font-weight: 600;">耐受性</td>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1;">对 PCR 抑制剂（如血液中的血红素）敏感。</td>
                <td style="padding: 10px; border: 1px solid #cbd5e1;">高耐受性，因为数据基于终点判断而非反应速率。</td>
            </tr>
        </table>
    </div>

    <h2 style="background: #f1f5f9; color: #0f172a; padding: 10px 18px; border-radius: 0 6px 6px 0; font-size: 1.25em; margin-top: 40px; border-left: 6px solid #0f172a; font-weight: bold;">临床应用场景：精准定量的力量</h2>
    <p style="margin: 15px 0; text-align: justify;">
        ddPCR 的高灵敏度和绝对定量特性使其在以下领域不可替代：
    </p>
    <ul style="padding-left: 25px; color: #334155;">
        <li style="margin-bottom: 12px;"><strong>液体活检 (Liquid Biopsy)：</strong> 监测血液中 <strong>[[ctDNA]]</strong> 的动态变化，用于肿瘤早筛、伴随诊断（如 EGFR T790M 检测）及 <strong>[[微小残留病]] (MRD)</strong> 的追踪。</li>
        <li style="margin-bottom: 12px;"><strong>拷贝数变异 (CNV) 分析：</strong> 能精确区分 2 拷贝与 3 拷贝的微小差异，常用于 HER2 扩增确证或 SMA 基因携带者筛查。</li>
        <li style="margin-bottom: 12px;"><strong>基因与细胞治疗质控：</strong> 准确测定病毒载体（如 <strong>[[AAV]]</strong>, Lentivirus）的滴度，或监测 CAR-T 细胞在体内的存续数量。</li>
    </ul>

    <h2 style="background: #f1f5f9; color: #0f172a; padding: 10px 18px; border-radius: 0 6px 6px 0; font-size: 1.25em; margin-top: 40px; border-left: 6px solid #0f172a; font-weight: bold;">关键相关概念</h2>
    <div style="background-color: #f8fafc; border: 1px solid #e2e8f0; border-radius: 8px; padding: 15px; margin: 20px 0;">
        <ul style="margin: 0; padding-left: 20px; color: #334155;">
            <li style="margin-bottom: 8px;"><strong>[[微流控]] (Microfluidics)：</strong> ddPCR 的物理基础，精确控制微小流体以生成尺寸均一的微滴。</li>
            <li style="margin-bottom: 8px;"><strong>[[泊松分布]] (Poisson Distribution)：</strong> 解决“数字PCR并非只有0和1”问题的数学工具，校正多靶标重叠概率。</li>
            <li style="margin-bottom: 8px;"><strong>[[终点法PCR]] (End-point PCR)：</strong> 与 qPCR 的实时检测不同，ddPCR 仅在扩增完全结束后进行一次性检测。</li>
            <li style="margin-bottom: 8px;"><strong>[[低频突变]]：</strong> 在大量野生型背景下存在的极少量突变 DNA，是 ddPCR 的主战场。</li>
        </ul>
    </div>

    <div style="font-size: 0.92em; line-height: 1.6; color: #1e293b; margin-top: 50px; border-top: 2.2px solid #0f172a; padding: 15px 25px; background-color: #f8fafc; border-radius: 0 0 10px 10px;">
        <span style="color: #0f172a; font-weight: bold; font-size: 1.05em; display: inline-block; margin-bottom: 15px;">学术参考文献与权威点评 [Academic Review]</span>
        
        <p style="margin: 12px 0; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; padding-bottom: 10px;">
            [1] <strong>Hindson BJ, et al. (2011).</strong> <em>High-throughput droplet digital PCR system for absolute quantitation of DNA copy number.</em> <strong>[[Analytical Chemistry]]</strong>. 83(22):8604-8610.<br>
            <span style="color: #475569;">[权威点评]：ddPCR 领域的奠基性论文，详细阐述了微滴生成系统的原理及其在 CNV 检测中优于 qPCR 的表现。</span>
        </p>
        
        <p style="margin: 12px 0; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; padding-bottom: 10px;">
            [2] <strong>Vogelstein B, Kinzler KW. (1999).</strong> <em>Digital PCR.</em> <strong>[[PNAS]]</strong>. 96(16):9236-9241.<br>
            <span style="color: #475569;">[学术点评]：虽然早于 ddPCR 商业化，但这篇论文首次提出了“数字PCR”的概念，确立了通过稀释和分割将指数扩增转化为线性计数的核心思想。</span>
        </p>

        <p style="margin: 12px 0; border-bottom: 1px solid #e2e8f0; padding-bottom: 10px;">
            [3] <strong>Oxnard GR, et al. (2014).</strong> <em>Noninvasive detection of response and resistance in EGFR-mutant lung cancer using quantitative massive parallel sequencing of cell-free plasma DNA.</em> <strong>[[Clinical Cancer Research]]</strong>. 20(6):1698-1705.<br>
            <span style="color: #475569;">[学术点评]：临床转化应用典范，验证了 ddPCR 在肺癌患者血浆中检测 EGFR T790M 耐药突变的高灵敏度。</span>
        </p>
    </div>

    <div style="margin: 40px 0; border: 1px solid #e2e8f0; border-radius: 8px; overflow: hidden; font-family: 'Helvetica Neue', Arial, sans-serif; font-size: 0.9em;">
        <div style="background-color: #eff6ff; color: #1e40af; padding: 8px 15px; font-weight: bold; text-align: center; border-bottom: 1px solid #dbeafe;">
            微滴数字PCR · 知识图谱
        </div>
        <table style="width: 100%; border-collapse: collapse; background-color: #ffffff;">
            <tr style="border-bottom: 1px solid #f1f5f9;">
                <td style="width: 95px; background-color: #f8fafc; color: #334155; font-weight: 600; padding: 10px 12px; text-align: right; vertical-align: middle; white-space: nowrap;">上游技术</td>
                <td style="padding: 10px 15px; color: #334155;">[[PCR]]•[[微流控芯片]]•[[油包水乳化]]•[[荧光探针]]</td>
            </tr>
            <tr style="border-bottom: 1px solid #f1f5f9;">
                <td style="width: 95px; background-color: #f8fafc; color: #334155; font-weight: 600; padding: 10px 12px; text-align: right; vertical-align: middle; white-space: nowrap;">关键竞品</td>
                <td style="padding: 10px 15px; color: #334155;">[[qPCR]]•[[BEAMing技术]]•[[NGS]]•[[芯片数字PCR(cdPCR)]]</td>
            </tr>
            <tr style="border-bottom: 1px solid #f1f5f9;">
                <td style="width: 95px; background-color: #f8fafc; color: #334155; font-weight: 600; padding: 10px 12px; text-align: right; vertical-align: middle; white-space: nowrap;">临床关联</td>
                <td style="padding: 10px 15px; color: #334155;">[[NIPT]]•[[病原微生物检测]]•[[环境监测]]•[[Bio-Rad]]</td>
            </tr>
            <tr>
                <td style="width: 95px; background-color: #f8fafc; color: #334155; font-weight: 600; padding: 10px 12px; text-align: right; vertical-align: middle; white-space: nowrap;">数据统计</td>
                <td style="padding: 10px 15px; color: #334155;">[[泊松分布]]•[[置信区间]]•[[阈值设定]]•[[拷贝数浓度]]</td>
            </tr>
        </table>
    </div>

</div>