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RNA提取流程
...信使RNA(mRNA)的抽提（自己的总结） 1、实验目的 提取人体细胞的总RNA和mRNA。 2、本实验所需试剂 1）、CNE-2细胞及培养细胞的一系列条件， 2）、PBS缓冲液，TRIZOL试剂， 3）、DEPC处理过的水、大、中、小Tip及...
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RNA提取实验方法流程
1、实验目的 提取人体细胞的总RNA和mRNA。 2、本实验所需试剂 1）、CNE-2细胞及培养细胞的一系列条件， 2）、PBS缓冲液，TRIZOL试剂， 3）、DEPC处理过的水、大、中、小Tip及1.5mlEP管, 4）、新的氯仿、异丙醇和...
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核酸分离纯化实验技术指南
总RNA提取常见问题分析Q：RNA降解A：1.新鲜细胞：如果试剂没有问题，且外源性污染也可以排除，那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞，一定要使裂解液能覆盖住细胞。2.新鲜组织：某...
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核酸分离纯化实验技术指南
总RNA提取常见问题分析Q：RNA降解A：1.新鲜细胞：如果试剂没有问题，且外源性污染也可以排除，那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞，一定要使裂解液能覆盖住细胞。2.新鲜组织：某...
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动植物组织mRNA提取
...(pH8.0)，0.05%SDS。 四、操作步骤 （一）动植物总RNA提取-Trizol法 Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫克至几克。用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。RNA可直接用于Northern斑点...
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广东省医学继续教育项目——实用分子生物学实验技术培训班招生简章
...级二类学分：12学分。教学内容如下：1.动物组织总RNA的提取：11月12日实验内容：动物组织总RNA的提取、RNA电泳；讲授内容：组织总RNA提取原理，临床标本RNA的提取及保存的注意事项等。2.RT-PCR技术：11月13日实验内容：RT-PCR、电...
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RNA的提取和cDNA合成
第一节概述 从真核生物的组织或细胞中提取mRNA,通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链,将双链cDNA和载体连接,然后转化扩增,即可获得cDNA文库,构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相...
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人正常胃黏膜细胞全长cDNA文库的构建及鉴定
...1细胞于2009年6月18日购自中南大学湘雅中心实验室。Trizol提取试剂购自美国Invitrogen公司;质粒小量提取试剂盒、PCRTaqMix试剂盒、OligotexdT30mRNAPurificationkit购自大连宝生物科技有限公司;其他生化试剂购自国内生物公司。 1.2方法...
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采取改良SDS法对天麻花葶DNA提取研究
采取改良SDS法对天麻花葶DNA提取研究(pdf) 【摘要】以天麻花葶为材料，采用改良SDS法对天麻DNA提取进行了研究，经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测，能得到高纯度的DNA，OD260/OD280在1.75～1.9之间，蛋白质、多糖、RNA等去...
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中国人MBLcDNA的克隆与序列分析1
...T-PCR cDNA克隆 序列分析摘 要 从中国汉族人胎肝组织提取总RNA，以RT-PCR方法获取了编码含信号顺序的全长甘露聚糖结合凝集素（MBL）肽链的cDNA片段，将其与pGEM-T载体连接，转化大肠杆菌TG1，建立了MBL的cDNA克隆。序列分析表...
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尿脱落细胞端粒酶催化亚基mRNA检测在膀胱癌诊断和监测复发中的意义
...水洗涤，取少许沉渣涂片行细胞学检查，余沉渣备总RNA的提取。1.3.2总RNA提取严格按Trizol说明从尿沉渣脱落细胞中提取总RNA，用紫外分光仪检测A260/A280比值，计算总RNA纯度。1.3.3RT-PCR用异硫氰酸胍一步法提取细胞总RNA。逆转录制...
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用16SrRNA探针定量测定普氏立克次体在细胞内的繁殖量
...量测定胞内微生物繁殖的方法。方法从立克次体感染细胞提取总RNA为样品或用硫氰酸胍裂解感染细胞，以裂解物为样品，用32P标记的16SrRNA特异探针做RNA酶保护分析。根据探针分子结合数，计算出检测到的靶序列分子数，反映胞...
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登革病毒NS3全基因的扩增与克隆
...RNA的5391～5411碱基序列的反义股互补。 1.5 病毒RNA的提取 用DV-2NGC株感染C6/36细胞，待细胞病变达2+～3+时，取200μL病毒培养上清液，根据Chomczynskin的异硫氰酸胍氯仿快速一步法［5］略加改良后，提取病毒核酸RNA。简言之，...
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人白细胞分化抗原CD59基因克隆及序列分析
...59分子与T细胞活化的关系。方法：通过设计和合成引物、提取细胞总RNA进行逆转录反应，经PCR扩增目的片段，并将其克隆于pUC18及pUC19质粒上，测定其DNA序列。结果：从Jurkat细胞总RNA中扩增得到396bp片段，序列测定证实该片段为包...
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HCN4基因在风心二狭心房纤颤患者心房组织中mRNA表达初探*
...发生机制奠定理论基础。方法取手术患者心耳组织100mg，提取RNA后应用半定量逆转录－PCR方法检测mRNA含量，并对PCR产物测序分析。以HCN4基因mRNA和内参β-actin含量的比值作为评价HCN4基因mRNA表达水平指标。结果测定HCN4基因cDNA序列...
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大鼠MHC-Ⅰ类基因cDNA的克隆
...粒pBV220为华西医科大学钩体研究室伍卫华教授惠赠。总RNA提取试剂盒（QIAGen公司），RT-PCR及PCR试剂盒（GibcoBRL），EcoRI，BamHI，PruI，SspI，PstI内切酶及DNAMarker（华美公司），RNA酶（Promega），低溶点琼脂糖（Sigma），T4连接酶（GibcoBR...
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PSA基因扩增研究及其在核酸杂交中的应用
...时，其生长速度则显得极为缓慢。 1.3.2LNCaP细胞总RNA提取培养LNCaP细胞至对数生长期，离心收集，PBS洗2次，计数，每管1ml约含1×107个细胞，按Trizol试剂说明书操作步骤提取总RNA，全过程严格在无RNase下操作，从一管中取3&mu...
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RT-PCR法检测MYCT-1基因在GES-1细胞中的表达
...探讨GES-1细胞作为RNA干涉细胞模型的价值。方法用TRIZOL法提取GES-1细胞总RNA，RT-PCR法扩增MYCT-1cDNA，DNA测序验证。结果在GES-1细胞中检测到504bpMYCT-1cDNA片段，测序证实与GenBank报道序列完全一致。结论GES-1细胞中存在MYCT-1表达，可作...
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补体C5b-9复合物诱导大鼠肾系膜细胞iNOSmRNA表达的实验研究
...(MC)表达诱生性一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的影响。方法：首先提取人血清补体C5b-9复合物，然后用人C5b-9复合物刺激培养的大鼠MC，检测MC在受C5b-9复合物刺激后3、6、24和48h时iNOSmRNA的表达情况。同时检测其培养上清液中一氧化氮(NO)代...
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弓形虫依钙蛋白激酶Calpain-like的克隆及生物学特性
...购自广东省实验动物中心。 1.1.2主要化学试剂 RNA提取试剂盒（RNeasyMiniKit）、反转录试剂盒购自Invitrogen公司；TaqDNA聚合酶、质粒抽提试剂盒购自天根生化公司；dNTP,PCR产物纯化试剂盒购自Promega公司；核酸共沉剂、EcoRⅠ、B...
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前列腺特异抗原研究进展与挑战(摘要)
...降低。外源性的核糖核酸酶(RNase)污染，特别是用RNase处理提取DNA时，通常是RNA丢失的一个重要原因。防止这种污染对保护RNA降解是绝对必需的，但对所有的RNA项目分析却是不够的。提取RNA时，常用RNase抑制剂如焦碳酸二乙酯(DEPC)...
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肾癌患者外周血中survivinmRNA的表达
...时取10例健康志愿者外周血作为正常对照。1.2主要材料RNA提取试剂Trizol、DNAMarker、琼脂糖均购自北京天为时代科技有限公司。RTPCR试剂盒为Takara公司产品。survivinmRNA引物参考文献[3]设计，由上海生工生物工程技术服务有限公司...
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减少内源性核糖核酸酶对逆转录聚合酶链反应的影响
...降低。外源性的核糖核酸酶(RNase)污染，特别是用RNase处理提取DNA时，通常是RNA丢失的一个重要原因。防止这种污染对保护RNA降解是绝对必需的，但对所有的RNA项目分析却是不够的。提取RNA时，常用RNase抑制剂如焦碳酸二乙酯(DEPC)...
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hIL－16cDNA的克隆、测序及在E.coli中的表达与纯化研究
...，成功地表达了重组hIL－16。hIL－16cDNA的扩增：从人PBMC中提取总RNA，poly(T)8－12反转录cDNA,以半巢式PCR扩增出特异的DNA片段。hIL－16cDNA的克隆、测序与表达：利用E.coli表达载体pTrxFus,构建hIL16cDNA的重组质粒，转化E.coli后，经色氨...
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Nogo-c基因的克隆、测序及真核表达载体的构建
...pcDNA3.1购自Invitrogen公司;大肠埃希菌DH5α由本室保存;总RNA提取Trizol试剂为Gib-co公司产品;全自动测序由博亚公司完成;限制性内切酶、T4DNA连接酶、RT-PCRKit均为TakaRa公司产品;其他生化试剂均为国产分析纯。 1.2总RNA的提取细胞用Trizol...
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中国人IL-18结合蛋白Cdna的克隆和序列分析
...其结构与功能的关系。方法 从中国汉族人的胎盘组织中提取总RNA，以RT-PCR方法扩增出全长585个bp的IL-18BP cDNA，将其与表达载体pcDNA3连接，转化大肠杆菌DH5α，建立了hIL-18BP的cDNA克隆。结果 序列分析表明，与国外文献报道的人...
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家蝇Attacin基因在家蝇三龄幼虫中的时间表达模式研究
...，继以100：1：200的麦麸，奶粉，水混合喂之。 1.3RNA提取提取步骤参见TrizolReagent(Invitrogen)使用说明。利用紫外分光仪测定A260、A280时RNA的浓度,以及蛋白质含量。RNA电泳,凝胶成像系统照相。 1.4RT-PCR逆转录反应总体积25μl,...
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肾移植受者血中PBMCs的基因表达谱分析
...外周血单个核细胞。标本均置于液氮罐保存。采用一步法提取总RNA，同组RNA标本同量混合，用荧光染料Cy3-dUTP标记对照组总RNA，用Cy5-dUTP标记术后组总RNA。逆转录标记cDNA探针。采用高通量基因表达谱芯片（16，920点基因）进行芯...
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趋化因子MIP-3α的克隆与表达
...α基因，表达并初步纯化MIP-3α融合蛋白。方法从扁桃体中提取总RNA，再进行RT-PCR，扩增MIP-3α成熟蛋白基因，并在5‘和3‘分别添加NcoI和EcoRI酶切位点，通过这两个酶切位点重组于pET32a（+）载体上，转化E.coli.DH5α，筛选阳性克隆...
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胃癌患者外周血Survivin基因mRNA表达及其临床意义
...标记淬灭基团DABCYL；扩增片段大小121bp。1.2方法1.2.1总RNA提取术前取患者静脉血5ml，枸橼酸钠抗凝，淋巴细胞分离液（灏洋公司产品）分离有核细胞，生理盐水洗涤3次，于-80℃冰箱保存。采用Trizol（Invitrogen公司产品）试剂提取细...