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质粒DNA的纯化
.../ml），然后将ＤＮＡ贮于－20℃。 （二）氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环ＤＮＡ １．连续梯度 １）测量ＤＮＡ溶液的体积，按lg/ml的用量精确地加入固体CsCl,将溶液加温至30℃助溶。温和地混匀溶液直到盐...
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溴化乙锭EB净化和处理方法
...的同时，我也把我综合收集到的资料发给大家看一看。溴化乙锭EB净化和处理方法EB是我们从事生命科学尤其是分子生物学经常要接触的致癌性物质,且不好处理.现提供如下方法,供参考.特别是刚走进实验室未生育的新同行,一定得...
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实验室有毒物质介绍和防护注意事项
...肌肤。吸收：吸收危险性很低。2.EB：EB（Ethidiumbromide，溴化乙锭）溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号，观察琼脂糖凝胶...
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DNA的提取和纯化
...加热裂解时可释放相对大量的糖类，当随后用氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心进行质粒纯化时它们会惹出麻烦。糖类会在梯度中紧靠超螺旋质粒DNA所占位置形成一致密的、模糊的区带。因此很难避免质粒DNA内污染有糖类，而糖类...
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废弃溴化乙锭EB净化和处理方法
实验室中经常有EB被打翻或EB废弃物的处理问题，如何做到标准处理？1严禁随便丢弃。因为EB是强致癌性，而且易挥发，挥发至空气中，危害很大。2废EB溶液的处理方法(1)对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液，可如下处理：a.将EB溶液用水...
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核酸电泳的指示剂与染色剂
...核酸电泳后，需经染色后才能显现出带型，最常用的是溴化乙锭染色法，其次是银染色. 溴化乙锭(ethidiumbromide，EB)是一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下，发出红色荧光.根据情况可在凝胶电...
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PCR扩增产物的电泳分析
...核酸电泳后，需经染色后才能显现出带型，最常用的是溴化乙锭染色法，其 次是银染色. 溴化乙锭(ethidiumbromide，EB)是一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对 之间，在紫外线激发下，发出红色荧光.根据情况可...
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质粒DNA的大量制备
...ey(1981)的方法修订而成]可与随后的纯化步骤如氯化钯－溴化乙锭梯度平衡离心等步骤联合使用。建议该法只用于经氯霉素处理的培养物，未处理的培养裂解后过于粘稠，不利操作。当从大肠杆菌ＨＢ101或其衍生质粒（包括ＴＧ1...
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枯草杆菌对氨茴环霉素的抗性
... 对ANC强抗性突变株DM104对化学特性不相关的化合物如溴化乙锭和诺丹明产生交叉抗性。钙通道阻断剂异搏定使突变株失去对氨茴环霉素的抗性。基因克隆获得了4个带有DM104染色体上不同片段的重组质粒，只有1个片段与已知的枯...
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PCR-微孔板反向杂交法检测HBVDNA
...，扩增产物同时作微孔板反向杂交法和琼脂糖凝胶电泳溴化乙锭染色法检测，结果见表1。表1 PCR-微孔板反向杂交法检测灵敏度血清稀释倍数病毒拷贝数杂交法 450nm处吸光度溴化乙锭法未稀释2×1051.454+1012×1041.413+1022×1031.312+1...
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质粒DNA的碱裂解法提取与纯化
...质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。例如，氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心、离子交换层析、凝胶过滤层析、聚乙二醇分级沉淀等方法，但这些方法相对昂贵或费时。对于小量制备的质粒DNA，经过苯酚、氯仿抽提，RNA酶消化和...
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表达人自身抗原SSA/Ro60重组体的构建及鉴定
...min，共计30个循环；最后在72℃中延伸10min。扩增产物经溴化乙锭-琼脂糖凝胶电泳检测。 1.2.5 PCR产物酶切及回收 将PCR产物24μl用BamHI内切酶进行单酶切，37℃2h。加入EcoRI内切酶进行酶切37℃2h。将经2次酶切产物经溴化乙锭-...
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琼脂糖凝胶电泳
...一般200～400bp的PCR产物50V电压，电泳20～40min即可. 8.溴化乙锭染色后，紫外仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子量标准比较被扩增产物的大小.作者：
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三种染色方式下四种核酸染料的灵敏度比较
...影响及作用机制。使用染胶法、染样品法及后染法比较溴化乙锭（EB）与3种新型核酸染料GoldViewnaII、GoldView及DNAGreen染色DNA的灵敏度。方法在琼脂糖凝胶电泳中，分别在3种染色方式下使用4种核酸染料对凝胶中的DNA进行染色，观察...
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幼儿园儿童巨细胞病毒分离毒株的限制性酶切谱分析
...〔1〕。 病毒DNA的纯化：上述提取的HCMVDNA样品在含溴化乙锭的0.8%低熔点琼脂糖凝胶内电泳，长波紫外灯下切取HCMVDNA电泳条带，参照分子克隆实验指南回收凝胶中DNA。 限制性核酸内切酶的应用及消化产物的电泳：取2μgHCMV...
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Southern杂交
...维素滤膜或尼龙膜，滤纸。 3、试剂： (1)10mg/ml溴化乙锭（EB）。 (2)50×Denhardt‘s溶液：5gFicoll-40,5gPVP,5gBSA加水至500ml,过滤除菌后于-20℃储存。 (3)1×BLOTTO：5g脱脂奶粉，0.02%叠氮钠，储于4℃。 (4)预杂交溶液：6×SSC...
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质粒消除现象的研究现状与意义
...染料包括吖啶黄(Acriflavine)、吖啶橙(Acridineorange，AO)、溴化乙锭(Ethidiumbromide，EB)等可用作质粒消除剂(Curingagent)，其作用机理是选择性地抑制质粒的复制。吖啶橙是嵌入DNA双链中影响质粒复制的色素，据报道［5］其消除率为50%。Na...
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实验室常用贮存液的配制参数
...NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。 14．溴化乙锭（10mg/ml溶液） 【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。 【注意...
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实验室常用贮存液的配制参数
...NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。 14．溴化乙锭（10mg/ml溶液） 【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。 【注意...
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第二节 PCR技术的原理
...见，其扩增的倍数是巨大的，将扩增产物进行电泳，经溴化乙锭染色，在紫外灶照射下（254nm）一般都可见到DNA的特异扩增区带。作者：
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存活素反义寡核苷酸对甲状腺癌细胞生长的抑制作用
...胞中存活素mRNA、蛋白表达水平，DNA裂解分析、吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡水平和形态变化，MTT法检测细胞生长抑制情况。结果转染ASODN各组细胞存活素mRNA和蛋白表达均较空白对照组、SODN组明显减弱...
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可注射性骨组织工程载体研究进展
...更多的病例收集和长期追踪。 4聚氧乙烯类 聚氧化乙烯类是具有良好生物相容性的高分子材料，可溶于水，随浓度的增大其黏度也相应增大。在温度改变的条件下固化为水凝胶。它与蛋白质和大部分生物大分子不发生作...
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容量敏感外向整流性氯通道参与氧化应激介导的系膜细胞凋亡
...胞膜片钳技术用于检测VSOR氯电流.细胞凋亡通过吖啶橙/溴化乙锭荧光染色、电子显微镜、TUNEL染色和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性确定。结果150μmol/LH2O2激活系膜细胞VSOR氯电流，H2O2激活的氯电流具有典型的VSOR氯电流电生...
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PCR-SSCP技术
...丙烯酰胺凝胶电泳;④最后通过放射性自显影、银染或溴化乙锭显色分析结果.若发现单链DNA带迁移率与正常对照的相比发生改变，就可以判定该链构象发生改变，进而推断该DNA片段中有碱基突变.该方法简便、快速、灵敏，不需要...
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DNA酶切及凝胶电泳
...法）所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidiumbromide,EB染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外,还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA条带,用于以后的克隆...
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PCR和RT-PCR技术
...技术。一般，经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴化乙锭染色的凝胶上观察到。反应包括几个成分（表1）。模板可以为纯化的基因组或质粒DNA；由RNA转化得到的cDNA；或未经纯化的粗制生物样品，如细菌克隆或噬菌斑。引...
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hNaDC1基因5’侧翼区转录调控序列系列载体构建与鉴定
...环；最后72℃延伸8min。PCR产物通过1%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色并照相予以鉴定。1.4pGL3hNaDC1A～E表达载体的构建与鉴定pGL3Basic空白载体和PCR产物均用KpnI、HindIII双酶切，回收pGL3Basic大片段和PCR产物，采用T4DNA连接酶将pGL...
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常规的琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡
...l蛋白酶K，37℃，30min。 9．加入12μl样品稀释液，含溴化乙锭的1.5％琼脂糖电泳，观察。作者：
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第三节 PCR操作范例及反应体系的组成
...糖凝胶电泳。一般情况下先在电泳缓冲液或凝胶中加1%溴化乙锭（EB）（每100ml加100μl），然后将已经制备好的1%～2%琼脂糖凝胶（用电泳缓冲液配制）放入电泳槽内，加入待测样品10μl，同时用分子量标准品作标记。琼脂糖浓度应...
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双重PCR-毛细管电泳法快速检测大豆中转基因成分
...l上样buffer混合后上样于30g／L琼脂糖凝胶中(含0.1μg／ml溴化乙锭)。在0.5×TBE电泳缓冲液中，于100V电压下，电泳50min，采用pUC19DNA／MspI(HpaⅡ)DNAMarker同时电泳，然后用UVI紫外成像分析仪观察结果。2结果与讨论2．1毛细管电泳条件的...