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第十八章 诊断分子生物学基本技术--第一节 概述
...单链之间的碱基再以氢键结合可形成较稳定的核酸大分子双链结构（二级结构）。 核酸的简写方式为5′AGCTGTAC3′，此外的英语字母已不代表碱基，而是指核苷酸。核酸的书写方向与合成方向一致，都是5′→3′。习惯上碱基...
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“转叶绿体”——转基因抗虫作物的新策略
...(Science)杂志发表论文宣称，他们利用一种在叶绿体中转入双链RNA的策略，生产出一种抗虫的转基因马铃薯。 通常情况下，RNA在细胞中以单链的形式存在，双链RNA(dsRNA)是一种特殊形式。如果用特异的双链RNA喂食害虫，双链RNA...
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第二节 核酸分子杂交法
...件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。待测核酸序列为性病病原体基因组或质粒DNA。探针以放射核素或非放射性核素标记，以利于杂交信号的检...
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第二十三章 DNA重组技术及其在基因诊断中的应用--第一节 工具酶
...合成一种或几种顺序专一的核酸内切酶。这些酶切割DNA的双链，因为它们的功能就是切割DNA，限制外源性DNA存在于自身细胞内，所以称这种核酸内切酶为限制酶。合成限制酶的细胞自身的DNA可以不受这种酶的作用，因为细胞还合...
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细胞治疗癌症获重大突破
合成的双链RNA进入肝细胞后，人体内的RNAi机制便会摧毁合成的RNA和任何与之匹配的、与肿瘤生长相关的信使RNA，阻止蛋白质的继续产生，从而使肿瘤停止生长.... 据美国媒体报道，美国阿尔尼拉姆生物技术公司日前宣布他们...
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我国科学家尝试使用核酸干扰技术治疗乳腺癌
...途径。 研究发现，RNA干扰是通过大约21个核苷酸长的双链RNA（siRNA）高效地抑制靶基因，作用于动物和人体的内源和外源基因的表达。2001～2002年，课题组采用该技术先后对两批动物模型实施了治疗研究。据论文报道，hdm2是...
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第一章 基因诊断与性传播疾病--第一节 基因诊断的分子生物学基础
...级结构形式。目前发现许多病毒DNA，线粒体DNA，都是环型双链DNA，而具有超螺旋结构。当超螺旋型DNA的一条链上出现缺口时，超螺旋结构被松开，可解旋形成开环型结构。 DNA的三级结构与其结合的蛋白质有关。真核细胞染色...
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美找到癌症克星有望包治百病
...RNAi）机制，原始生物就利用这个系统来甄别和摧毁病毒双链RNA和病毒信使RNA。哺乳动物由于自身带有免疫系统，所以RNAi机制的抗病毒功能就变得没有什么意义，不过包括人类在内的所有脊椎动物至今还在用RNAi来调节信使RNA的活...
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常用的分子生物学基本技术简介
...条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（probe）,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或...
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2-2-6核酸的变性和复性
...酸分子杂交 变性（denaturation）和复性（renaturation）是双链核酸分子的二个重要物理特性。也是核酸研究中经常引用的术语。双链DNA，RNA双链区，DNA：RNA杂种双链（hybridduplex）以及其它异源双链核酸分子（heteroduplex）都具有此...
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美国研制出一种全新抗病毒药
...“劫持”这个细胞为己所用，复制出大量病毒，同时产生双链核糖核酸。此时，人体自身免疫系统为“反击”，会产生出一种蛋白质“抓住”双链核糖核酸，接着引发一系列反应，让病毒停止复制。不过，不少病毒可以“骗过”...
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RNA干扰技术在哺乳动物中的应用
...的一种抵御外来基因和病毒感染的进化保守机制.RNAi是由双链RNA触发的转录后基因沉默机制,具有序列特异性,在哺乳动物细胞中,RNAi由21～23个核苷酸组成的双链RNA引发.小干扰RNA(siRNA)可以在体外合成或通过表达载体在哺乳动物细胞...
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厦门大学生科院等miRNA研究成果发表于《Immunity》
...构成结构相似的RISC,在作用方式上二者有很大的相似性。双链RNA之所以能引起物特异性基因抑制是由于能激活细胞内的Dicer的酶复合生物所致。Dicer是一类多结构域的RNA酶III样蛋白，由核酸内切酸和解旋酶等组成，能识别异常双链...
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聚焦2006诺贝尔科学奖：沉默基因闪亮登场
...遗传学家和同事在英国《自然》杂志上发表了一篇题为《双链RNA在秀丽隐杆线虫中有力而独特的遗传干扰作用》的论文。其中一位是华盛顿卡内基研究所胚胎学部39岁的安德鲁·菲尔，另一位是马萨诸塞大学癌症中心38岁的克雷格...
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一项快速干扰RNA技术专利权的争议
...eiRNA的研究开发。在这个过程中，科学家把准备编入相关双链RNA（dsRNA）的质粒DNA植入目标细胞中，让细胞产生并传递特定的双链RNA顺序，然后，细胞的机制会使双链RNA裂开，形成特别编码的siRNA（即短干扰RNA），使目标基因沉默...
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分子杂交技术
互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。 杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该...
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核酸杂交
...核酸分子的传统方法。其原理是核酸变性和复性理论。即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开，而在条件恢复后又可依碱基配对规律形成双边结构。杂交通常在一支持膜上进行，因此又称为核酸印迹杂交。根据检测样...
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艾滋病毒核酸检测方法研究进展
...把目标RNA序列反转录成单链DNA，然后由RnaseH把DNA/RNA杂合双链的RNA降解，再由反转录酶在另一引物引导下合成双链DNA。DNA可在T7RNA聚合酶的作用下，经其启动子序列起动而转录RNA。随着RNA的合成反应进入等温循环。RNA又可在反转录...
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5-1-2参与DNA复制的有关物质
...一类特殊的蛋白质称为螺旋酶可以促使DNA在复制叉处打开双链。螺旋酶可以和单链DNA结合，并且与ATP结合，利用ATP分解成ADP时产生的能量沿DNA链向前运动促使DNA双链打开。目前，大肠杆菌中发现有两种螺旋酶参与这个过程，一种...
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siRNA治疗研究异彩纷呈
...Dicer的RNAseIII酶进一步缩短和处理，以产生不完全匹配的双链miR鄄NA。Dicer能同样将长的完全匹配的dsRNA处理成siRNA。一种多酶复合物，包括Argonaute2和RNA诱导的沉默复合物（RISC），偶联到miRNAduplex或siRNAduplex，并放弃一根链（一般认...
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揭示嵌入基因组DNA中RNA移除机制
...结构要比它的长度更能影响它导致基因突变的能力。”对双链DNA而言，当碱基错误配对或者在一条DNA链上一个或几个核苷酸过量或缺失时，错配就会产生。如果错配不能得到纠正的话，它们将导致突变。研究人员发现在染色体DNA...
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长春应化所在化学生物学生物分子识别领域取得可喜进展
...序列的稳定性。进一步实验结果表明羧基化纳米管可阻止双链形成并选择性诱导富含胞嘧啶的人类端粒序列形成四链结构，该结构被称为“i-motif”。人类端粒DNA形成四链结构可以阻止癌细胞端粒酶活性，破坏以RNA序列为模板合...
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第三节 DNA的二级结构与功能
...中，大部分DNA由B－DNA经过C－DNA，最终变构为A－DNA。若DNA双链中一条链被相应的RNA链所替换，会变构成A－DNA。当DNA处于转录状态时，DNA模板链与由它转录所得的RNA链间形成的双链就是A－DNA。由此可见A－DNA构象对基因表达有重要...
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研究揭示TALE蛋白新功能
...元去识别任意序列的目标双螺旋DNA，并且构造出切割特异双链DNA序列的DNA酶TALEN(TALEnuclease)，从而用于在细胞中引入定点突变、定点敲除等操作。在此次研究之前，仅知道TALE蛋白能够识别双螺旋DNA，因此TALE蛋白主要应用在对基因...
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中国RNAi技术应用的骄傲
...用到RNAi技术的就有3篇。RNA干扰(RNAi)是利用具有同源性的双链RNA诱发序列特异的转录后基因沉默的现象，它可以通过抑制蛋白表达模拟基因敲除技术。从利用体外合成双链RNA到通过质粒稳定表达小型干扰RNA诱发RNA干扰现象。这项...
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2-1-2病毒基因组的结构和功能
...粒中。组成病毒基因组的DNA和RNA可以是单链的，也可以是双链的，可以是闭环分子，也可以是线性分子。如乳头瘤病毒是一种闭环的双链DNA病毒，而腺病毒的基因组则是线性的双链DNA,脊髓灰质炎病毒是一种单链的RNA病毒，而呼...
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分子生物学实验基础知识
...在于多种细菌，是染色体（核）以外的独立遗传因子，由双链环状DNA组成，几乎完全裸露，很少有蛋白质结合。质粒有严紧型和松弛型之分。严紧型由DNA多聚酶Ⅲ复制，一个细胞可复制1-5个质粒。而松弛型由DNA多聚酶Ⅰ复制，一...
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第二节 分子生物学实验基础
...在于多种细菌，是染色体（核）以外的独立遗传因子，由双链环状DNA组成，几乎完全裸露，很少有蛋白质结合。质粒有严紧型和松弛型之分。严紧型由DNA多聚酶Ⅲ复制，一个细胞可复制1-5个质粒。而松弛型由DNA多聚酶Ⅰ复制，一...
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DNA电镜技术及其应用
...白膜技术及Kleinschmice-Zahn技术)，并成功地在电镜下观察到双链DNA(dsDNA)分子，开始了应用电子显微镜研究DNA结构和功能的新时代［1］。以后经过方法学上的不断改进，又发展了许多新的技术，广泛应用于DNA结构与功能以及蛋白质-...
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miRNA的生物合成过程
...要成分，起到切割的作用。在这一复合体中，还存在一种双链RNA结合蛋白Pasha(partnerofDrosha)。在果蝇细胞和线虫中抑制Pasha的表达，干扰了pri-miRNA的剪切，使细胞内pri-miRNA的积累增多，成熟miRNA的量减少。Pasha在复合体中的具体功...