瘧疾間接免疫熒光試驗_化驗及醫學檢查、補體結合試驗、血清學檢查

心氣虛，則脈細；肺氣虛，則皮寒；肝氣虛，則氣少；腎氣虛，則泄利前後；脾氣虛，則飲食不入。

1 拼音

nuè jí jiān jiē miǎn yì yíng guāng shì yàn

2 概述

瘧疾的血清學診斷方法頗多，本文僅介紹常用的間接免疫熒光試驗法。

3 檢查名稱

瘧疾間接免疫熒光試驗

4 分類

血清學檢查 > 補體結合試驗

5 瘧疾間接免疫熒光試驗的原理

受檢血清中的抗瘧原蟲抗體與血片上的瘧原蟲抗原相結合，繼加熒光標記的抗人IgG抗體，使與血片上的人IgG作用，而在抗原部位顯現熒光。

6 試劑

（1）抗原血片採用食蟹猴瘧原蟲薄血膜片和惡性瘧原蟲薄血膜片。專業研究機構可供應。保存於4℃或低溫冰箱中備用。

（2）熒光標記抗人IgG，國內有商品供應。

7 操作方法

（1）按常規方法採集血清或用口徑1.2cm的玻（鐵）管的管口在濾紙上壓出圓形印跡。從受檢者耳或手指取血並加滿圓圈，其血量約爲20μl（約相當血清10μl），編號後陰幹，放入有乾燥劑的密封塑料袋內，運送至實驗室，4℃可保存半年，-20℃可保存2年。檢測時將幹血滴剪下後放入反應板凹孔中，加0.01mol/L磷酸鹽緩衝液0.2ml（pH值7.2），4℃浸泡過夜即成相當於1∶20的血清稀釋液。

（2）從冰箱中取出抗原血片，立即用電風扇吹乾，用特種蠟筆將每張抗原片劃分成若干小格，每小格試1個標本或1個滴度，每格加血清1滴。每批試驗均需設陰、陽性參考血清和PBS空白對照。加血清後立即移入溼盒，37℃溫育30min後，用0.01mol/L PBS（pH值7.2）緩慢沖洗後放入有PBS的缸內浸泡5～10min。

（3）逐格滴加用0.01mol/L PBS（pH值7.2）稀釋成1∶10的抗人IgG熒光抗體，置溼盒內37℃30min，同法洗滌後，每小格中加甘油和PBS等量混合液或蒸餾水，覆以蓋片，於熒光顯微鏡下鏡檢反應結果。

（4）結果判讀：以裂殖體和大滋養體胞漿的熒光強度和結構清晰程度區分，無熒光爲（－），熒光微弱、形態結構不清爲（±），熒光較弱、形態結構尚清楚爲（＋），另外根據熒光明亮度和結構清晰度的增加依次分爲（2＋）～（4＋）。

一般以1∶20血清稀釋度時熒光強度（＋）以上判爲陽性。

8 正常值

陰性＜1∶20。

9 化驗結果臨牀意義

熒光抗體法的陽性檢出率，一般均高於原蟲檢出率。對惡性瘧疾患者抗體效價爲1∶80或更高，可認爲是帶蟲者或近期感染瘧疾的標誌。

10 附註

該技術高度敏感和特異，多以病原體爲抗原，直觀性強，可用於多種寄生蟲病的診斷如瘧疾。