呼吸道合胞病毒抗體

1 拼音

hū xī dào hé bāo bìng dú kàng tǐ

2 英文參考

Respiratory syncytial virus antibody

3 概述

呼吸道合胞病毒（respiratory sycytial virus，RSV）是引起嬰幼兒下呼吸道疾病的最常見的病毒。呼吸道合胞病毒是單股負鏈RNA病毒，呈球形，有雙層脂質囊膜，囊膜上有刺突，即G和F蛋白。G對宿主細胞有吸附作用，F爲融合蛋白。

4 別名

anti-RSV

5 呼吸道合胞病毒抗體的醫學檢查

5.1 檢查名稱

呼吸道合胞病毒抗體

5.2 分類

血清學檢查 > 病毒的血清學檢查

5.3 呼吸道合胞病毒抗體的測定原理

酶聯免疫吸附試驗（ELISA）：以感染及未感染合胞病毒的細胞培養分別製備合胞病毒抗原及細胞對照抗原，分別包被於聚苯乙烯板上製成固相抗原，加入待檢血清後，血清中如含有抗合胞病毒抗體，則可結合於包被的合胞病毒抗體（而對照抗原則不能結合），形成抗原-抗體複合物，再加入酶標記的抗人IgG（即抗抗體），則形成抗原-抗體-酶標記抗抗體複合物，當加入相應酶的底物，在酶的催化作用下使原來無色的底物水解，氧化，還原呈現顏色反應。通過觀察顏色反應的強弱來了解抗體的存在及其滴度。

5.4 試劑

（1）聚苯乙烯微孔板。

（2）酶標檢測儀。

（3）呼吸道合胞病毒抗原：用呼吸道合胞病毒Long株感染Vero細胞，當病變呈＋＋＋＋時收穫，經100g/L去氧膽膽酸膽酸鈉處理，低速離心，收集上清即爲ELISA抗原，用同批正常細胞同法制備正常細胞抗原。亦可待細胞病變達＋＋＋時，傾去維持液，用滅菌去離子水洗2次，加入爲原培養液半量的去離子水，凍化3次，10000r/min離心，30min，取上清56℃滅活30min，正常細胞抗原亦用同法制備。

（4）患者雙份血清：急性期血清於發病3天內採取，恢復期血清於病後3周採取分離血清。

（5）辣根過氧化酶標記羊抗人IgG。

（6）包被液：即pH9.6碳酸緩衝液，其配製方法爲稱無水碳酸鈉（Na₂CO₃）159mg，碳酸氫鈉（NaH-CO₃）293mg，溶解至總量爲100ml的蒸餾水中。

（7）洗滌液：即0.5% Tween-20生理鹽水（NS-T），其配法爲100ml生理鹽水中加入0.5ml Tween20。

（8）稀釋液：即2%牛血清NS-T，其配製方法爲100ml洗滌液中加入2ml小牛血清。用於稀釋待測樣品及酶結合物。

（9）底物液：先配基質液，其配方是稱磷酸氫二鈉（Na₂HPO₄·12H₂O）18.4g，檸檬酸（C₆H₈O₇H₂O）5.1g，加蒸餾水至1000ml，配後分裝保存於4℃。再配底物液，其配法爲10ml基質液中加4mg鄰苯二胺，加5ml雙氧水（H₂O₂）。底物液應現用現配。

（10）終止液：即2mol/L，硫酸（H₂SO₄）。

5.5 操作方法

（1）用包被液將呼吸道合胞病毒抗原及正常細胞抗原作適當稀釋，包被於聚苯乙烯板，每孔100μl，4℃過夜。

（2）將雙份血清用稀釋液分別作系列倍比稀釋（急性期血清1∶100，恢復期血清1∶400稀釋開始），每孔加入100μl，置37℃ 2h。雙份血清應同時在同一板上測定。

（3）用稀釋液將酶標記抗人IgG作適當稀釋，每孔加入100μl，置37℃ 1h。

（以上每種試劑在作用完畢後甩去，用洗滌液洗3次後再加新的試劑）。

（4）加底物液，每孔100μl，37℃ 10～20min，並注意避光。

（5）加終止液以終止反應，每孔50μl，觀察結果。

每批試驗設固定的陽性血清、陰性血清及抗原對照等。

5.6 正常值

陰性。

5.7 化驗結果臨牀意義

陽性：呼吸道病毒感染（合胞病毒性肺炎、合胞病毒性毛細支氣管炎）。

5.8 附註

（1）酶聯免疫吸附試驗是一種敏感性較高的試驗方法，影響因素較多。爲了保證試驗結果的穩定和重複性，對抗原、抗體以及酶結合物的濃度需進行預試驗，選出合適的工作濃度，以便控制試驗條件。

（2）注意設各種對照（包括抗原、抗體以及酶結合物對照等，以便判定結果時比較）。

（3）雙份血清必須在同一酶標板上同時檢測。