-
5-1-3DNA聚合酶(DNAPolymerase)
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大肠杆菌DNA聚合酶Ⅱ大肠杆菌DNA聚合酶ⅢT4-DNA聚合酶真核生物的DNA聚合酶 此酶最早在大肠杆菌中发现，以后陆续在其他原核生物及微生物中找到。这类酶的共同性质是：[1]以脱氧核苷酸三磷酸（dNTP）为...
-
第二十三章 DNA重组技术及其在基因诊断中的应用--第一节 工具酶
...pi），如下式表示。 聚合酶主要有以下几种： 1．大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 大肠杆菌DNA聚合酶（E.ColiDNApolymerase）主要有3种作用：①5’→3’的聚合作用。但不是复制染色体而是修补DNA，填补DNA上的空隙或是切除RNA引物后...
-
第十六章 DNA的生物合成--第一节 DNA的复制
...为半保留复制。 1958年Meselson和Stahl利用氮标记技术在大肠杆菌中首次证实了DNA的半保留复制，他们将大肠杆菌放在含有15N标记的NH4Cl培养基中繁殖了15代，使所有的大肠杆菌DNA被15N所标记，可以得到15N桪NA。然后将细菌转移到...
-
5-1-4DNA连接酶(DNAligase)
...才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。 1．一般性质：大肠杆菌的DNA连接酶是一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，...
-
5-1-2参与DNA复制的有关物质
...ADP时产生的能量沿DNA链向前运动促使DNA双链打开。目前，大肠杆菌中发现有两种螺旋酶参与这个过程，一种称为螺旋酶Ⅱ或螺旋酶Ⅲ，与滞后链的模板DNA结合沿5‘→3‘方向运动;第二种称为Rep蛋白，和前导链的模板DNA结合沿3‘...
-
5-1-5DNA复制的过程
...，在前导链的复制引发过程中还需要其他一些蛋白质，如大肠杆菌的dnaA蛋白。这两种蛋白质可以和复制起点处DNA上高度保守的4个9bp长的序列结合，其具体功能尚不清楚。可能是这些蛋白质与DNA复制起点结合后能促进DNA聚合酶Ⅲ...
-
第四节 影响PCR的主要因素
...存1～2年。 三、DNA聚合酶 早在1956年Kornberg等就从大肠杆菌提取液中发现了DNA聚合酶，并且得到了DNA聚合酶Ⅰ纯品。DNA聚合酶Ⅰ是由分子量为109000的一条多肽链构成，此酶可被枯草杆菌蛋白酶分解为两个片段，一个片段分...
-
链置换扩增术（SDA）及其进展
...识别序列，核酸内切酶在其识别位点将链DNA打开缺口，DNA聚合酶继之延伸缺口3‘端并替换下一条DNA链。被替换下来的DNA单链可与引物结合并被DNA聚合酶延伸成双链。该过程不断反复进行，使靶序列被高效扩增。本文主要介绍SDA...
-
分子生物学实验基础知识
...术不可缺少的工具。主要有限制性内切酶、连接酶、核酸聚合酶、逆转录酶、核酸酶等。 限制性内切酶有Ⅰ型和Ⅱ型限制性DNA内切酶之分，Ⅱ型能严格识别核酸序列，并在识别区内特定的核苷酸处切开DNA双链。故通常所指都...
-
第二节 分子生物学实验基础
...术不可缺少的工具。主要有限制性内切酶、连接酶、核酸聚合酶、逆转录酶、核酸酶等。 限制性内切酶有Ⅰ型和Ⅱ型限制性DNA内切酶之分，Ⅱ型能严格识别核酸序列，并在识别区内特定的核苷酸处切开DNA双链。故通常所指都...
-
第十七章 RNA的生物合成--第一节 转录作用
...转录的方向及所用模板 RNA聚合酶催化下列反应： 大肠杆菌RNA聚合酶的研究得比较透彻的，这是一个分子量达50多万，全酶由五咱亚基组成，去掉δ亚基的部分称为核心酶，核心酶本身就能催化苷酸间磷酸二酸键形成。利...
-
第二十章 DNA重组与基因工程--第一节 工具酶
...界限，第一次使本来只存在于真核细胞中的蛋白质能够在大肠杆菌中合成，这是基因工程诞生的里程碑。科学界公认基因工程的出现是20世纪最重要的科学成就这一。标志人类主动改造生物界的能力进入新的阶段。分子生物学的...
-
HBVC区基因克隆和PCR条件优化
...为荧光定量PCR检测HBV摸索条件。方法将HBV基因组导入DH5α大肠杆菌，SDS碱裂解法小量提取大肠杆菌阳性构建质粒DNA，设计合适引物对HBVC区基因进行PCR扩增，对PCR条件中的退火温度、Mg2+浓度进行了优化，并比较三种不同TaqDNA聚合...
-
致肾盂肾炎大肠杆菌papA基因的克隆及序列分析
致肾盂肾炎大肠杆菌papA基因的克隆及序列分析中华微生物学和免疫学杂志2000年第3期第20卷细菌学作者：陈锦英 康宁 李方涛单位：天津医科大学微生物教研室关键词：肾盂肾炎；大肠杆菌；papA；聚合酶链反应 【摘要】 ...
-
第三节 RNA的复制
...苷酸为原料,合成方向仍是5'→3',完成RNA的合成. 大肠杆菌的RNA聚合酶由五个亚基构成,α2ββ'构成核心酶，再加上σ因子是全酶。RNA聚合酶识别并特异结合的DNA一段区域叫做启动子，启动子的序列中一10区和一35区很保...
-
3-1-3启动子
...和-35区的DNA结构细节。 RNA聚合酶与启动子的结合 大肠杆菌的RNA聚合酶与启动子结合的过程可分为两步。[1]酶找到启动子顺序并与其以“关闭“复合体形式(即双螺旋形式)相结合。这一步所识别的是-35序列，因为-35序列的...
-
中国人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的基因克隆及序列分析
... gyrA96 thil relAl）本室保存。pHP质粒为本室构建。TaqDNA聚合酶，限制性内切酶，T4DNA连接酶等均为华美公司产品。 1.2 方法 1.2.1 Hp基因组DNA的提取：按参考文献［3］中的方法操作。 1.2.2 ureB DNA的扩增：取Hp基因...
-
第三节 真核基因表达调控
...，可列举如下。 ▲真核基因组比原核基因组大得多，大肠杆菌基因组约4×106bp，哺乳类基因组在109bp数量级，比细菌大千倍；大肠杆菌约有4000个基因，人则约有10万个基因。 ▲真核生物主要的遗传物质与组蛋白等构成染...
-
人FasL分子的克隆、表达及多抗制备
...研究所免疫室，北京 100850）关键词：FasL；融合蛋白；大肠杆菌表达；多克隆抗体 ［摘 要］ 目的 获得人FasL蛋白，并对其功能进行初步研究。方法 用DNA重组法构建了FasLcDNA和谷胱甘肽转硫酶融合原核表达质粒pGEX-KG-hFL...
-
第十八章 诊断分子生物学基本技术--第一节 概述
...dTTP，总称dNTP。催化新链合成反应的酶是以DNA为模板的DNA聚合酶（DNA-dependentDNApolymerase）。DNA聚合酶需要一段寡核苷酸作为引物（primer）引导，以母链为模板，按碱基配对原则，将dNTP逐个由5′→3′方向合成新链，合成的新链走...
-
结核杆菌HSP65与汉坦病毒H8205株G2基因的构建
...试剂均为国产或进口分装。质粒pcDNA3.1/His，T-H8205G2质粒、大肠杆菌DH5α由华中科技大学同济医学院病原生物系黄汉菊教授赠送。 1.2方法 1.2.1结核杆菌基因组DNA的提取见文献［2］。 1.2.2HSP65基因和G2扩增根据结核杆菌H37R...
-
幽门螺杆菌HspA和UreB双价侯选疫苗株的构建
...，将它们融合插入原核表达载体pET-22b(+)中，并在BL21(DE3)大肠杆菌表达。结果 经测序，HspA-UreB(HU)融合基因片段由2061bp组成，为编码687个氨基酸残基的多肽。SDS-PAGE和免疫印迹分析检测发现，融合基因表达的蛋白相对分子质量约...
-
聚合酶链反应在幽门螺杆菌感染中的新进展
聚合酶链反应在幽门螺杆菌感染中的新进展 发现幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，Hp）至今已有十多年，在这十多年期间对Hp的研究进展飞速，已从细胞水平逐渐深入到分子水平。现在认为Hp是胃炎，消化性溃疡的主要致病因素，...
-
RNA的提取和cDNA合成
...酶和从表达克隆化的Moloney鼠白血病病毒反转录酶基因的大肠杆菌中分离到的鼠白血病病毒(MLV)反转录酶。AMV反转录酶包括两个具有若干种酶活性的多肽亚基,这些活性包括依赖于RNA的DNA合成,依赖于DNA的DNA合成以及对DNA：RNA杂交体...
-
第二节 反转录作用
...ption) 1970年Temin等在致癌RNA病毒中发现了一种特殊的DNA聚合酶，该酶以RNA为核板，根据碱基配对原则，按照RNA的核苷酸顺序(其中V与A配对)合成DNA。这一过程与一般遗传信息流转录的方向相反，故称为反转录，催化此过程的DNA...
-
竞争性PCR内参照菌的构建及应用
...。方法 通过整合载体pSX1-2和pUC19-attP-tetr将竞争模板插入大肠杆菌JM83染色体中，构建内参照菌JM83/16SN。以JM83/16SN作为内参照，建立PA竞争性PCR定量和半定量检测方法。结果 细菌质粒限制性酶切分析、药敏试验及染色体DNA指纹图...
-
植物中的一种新RNA聚合酶被发现
...程中起到重要作用。研究人员只在植物中找到了第四种RNA聚合酶，并且推测这种酶在植物中已经有2亿多年的历史。研究人员将这些发现刊登在3月的《细胞》杂志上。RNA聚合酶是一种酶或叫做蛋白机器，它对细胞的功能执行和生...
-
微小隐孢子虫重组BCG-CP15/60-23疫苗的构建及鉴定
...法 1.1材料 1.1.1菌株与质粒野生卡介苗（BCG-WT）及大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV262由美国哈佛大学公共卫生学院馈赠，pET-30a-CP15/60-23质粒由本实验室构建，大肠埃希菌DH5为本实验室保存。 1.1.2主要试剂TA克隆载体pM...
-
农科院分子遗传学试题（博士）2002年,2001年,1998年，1997年，1996年，1995年
...启动子的作用是什么？原核生物启动子有哪些特征？5、大肠杆菌和真核生物的蛋白质合成起始有何区别？6、病毒与细菌在遗传体系上有何区别？三、简述转座子的转座机制及遗传学效应四、分子遗传学在近二十年内取得了许多...
-
2002级《生物化学》每章的思考题、复习范围和要点
...是如何形成的?A、B、Z型有何区别?5、何谓拓扑异构现象，大肠杆菌中有哪些拓扑异构酶?6、同一种DNA分子以哪几种形式存在，在琼脂糖凝胶电泳上如何区别?7、复性速率与DNA顺序有何关系?何谓Cot1/2?人类基因组DNA中有哪几类重复序...