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cDNA文库构建策略及其分析研究进展
自20世纪70年代中期首例cDNA克隆问世以来，构建cDNA文库已成为研究功能基因组学的基本手段之一。cDNA便于克隆和大量表达，它不像基因组含有内含子而难于表达，因此可以从cDNA文库中筛选到所需的目的基因，并直接用于该目的...
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全长cDNA文库的构建——SMART技术
...此mRNA的3‘末端都带有一段PolyA，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5‘端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量的mRNA逆转录得到的cDNA文库、如何利用已知片断序列得到全长的cDNA（即RACE），曾...
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SMART技术
...此mRNA的3’末端都带有一段PolyA，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5’端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量的mRNA逆转录得到的cDNA文库、如何利用已知片断序列得到全长的cDNA（即RACE），曾...
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编码人分化抗原5C5全长cDNA的克隆及功能初探
编码人分化抗原5C5全长cDNA的克隆及功能初探中华微生物学和免疫学杂志2000年第3期第20卷基础免疫学作者：马凤蓉 阎民 孟晓燕 赵方萄 汪邁 史耕先 刘音 王讯 朱立单位：中国医学科学院基础医学研究所,中国协和医科...
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cDNA文库的构建
分为六个阶段：阶段1：反转录酶催化合成cDNA第一链阶段2：cDNA第二链的合成阶段3：cDNA的甲基化阶段4：接头或衔接子的连接阶段5：SepharoseCL-4B凝胶过滤法分离cDNA阶段6：cDNA与λ噬菌体臂的连接[阶段1：反转录酶催化合成cDNA第一链...
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人正常胃黏膜细胞全长cDNA文库的构建及鉴定
...个插入片段长度为0.5～2.0kb.结论构建的人正常胃黏膜细胞cDNA文库为高效全长的酵母双杂交cDNA文库,符合cDNA文库的要求,可进一步用酵母双杂交的方法探寻与胃疾病相关的基因。【关键词】胃黏膜细胞;cDNA文库;全长Constructionandidentif...
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RNA的提取和cDNA合成
...核生物的组织或细胞中提取mRNA,通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链,将双链cDNA和载体连接,然后转化扩增,即可获得cDNA文库,构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应基因组DNA序列差异...
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差异基因研究技术及其应用
...研究差异表达基因的主要方法及其原理分述如下。 1cDNA微阵列技术（cDNAmicroarrayhybridization） 该技术是指在固相支持物上直接将大量已知序列的探针有序固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，杂交信号阳性的探针序...
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人白细胞介素-3突变体的构建及在大肠杆菌中表达的研究
...子生物学教研室，重庆630038关键词：PCR定点突变；hIL-3；cDNA突变体；高水平表达；hIL-3突变体 中国图书分类号 R392.11 摘 要 目的：为了在大肠杆菌中高效表达hIL-3cDNA，获得hIL-3蛋白，拟对天然型hIL-3进行构建以获得新...
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cDNA第二链的合成
1)离心沉淀cDNA第一链，并重悬在50μl水中，加50μl2×第二链缓冲液(0.2mol／LHepes，pH6.9，20mmol／LMgCl2，5mmol／LDTT，0.14mol／LKCl，1mmol／L4种Dntp)，混合均匀。 2)每微克底物加大肠杆菌DNA聚合酶K1enow片段20～50单位，15℃反应20小时，...
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cDNA第一链的合成
...过体外无细胞系统翻译找出目的基因mRNA以后，变可进行cDNA第一链的合成，其步骤包括： 1）在Ependorf管中加50pmol/L的一种α32PdNTP和1mg/ml的mRNA10μl（10μg），100mmol/L甲基氢氧化汞1μl，室温反应l0分钟，使RNA变性。 2)加100mmol/L...
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葎草花粉cDNA表达文库构建成功
...地区首次成功构建出一个含有5×105重组子的中药葎草花粉cDNA表达文库。 花粉致敏引起的变态反应病，是影响人类健康的主要因素之一。采用基因重组技术制备变应原疫苗，并用于变态反应性疾病的诊断和治疗，是目前国内...
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基因表达差异分析方法进展
...有的方法基本上都是利用共同引物将不同的mRNA反转录成cDNA，以cDNA为对象研究基因表达的差异。1992年Liang等［2］建立了一种差异显示反转录pCR法（differentialdisplayreversetranscriptionPCR，dDRT-PCR），为检测成批基因表达的差异开辟了新...
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人原发性肝癌组织cDNA文库的构建及鉴定
...2005Vol.23No.5P.289-29215（杭州）为了构建人原发性肝癌组织cDNA文库，筛查与原发性肝癌发生特异相关的基因，为探讨原发性肝癌的发病机制及基因治疗奠定基础。研究者提取人原发性肝癌组织总RNA并纯化其mRNA,逆转录合成单链cDNA，...
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中国人IL-18结合蛋白Cdna的克隆和序列分析
中国人IL-18结合蛋白Cdna的克隆和序列分析免疫学杂志2000年第4期第16卷基础免疫学作者：傅奕 赵惠仁 裴冬生单位：傅奕（徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心，江苏 徐州 221002）；赵惠仁（徐州医学院生物化学与分...
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我国科学家完成毛竹全长cDNA文库构建
...前完成了包括毛竹叶片、笋和萌发种子等在内的毛竹全长cDNA文库构建，并精确测定了1万余条基因序列。这是公共数据库中继水稻和拟南芥以外，第三大植物全长cDNA数据信息资源，取得了林业领域基因组学研究的重大突破。有关...
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基因分离克隆的方法
...测目标DNA密度大及并行种类多等优点。②利用同源探针从cDNA或EST微列阵中筛选分离目的基因。目前有DNA芯片、cDNA芯片两种。其基本步骤包括：基因芯片的制备、靶样品制备、杂交与检测、目的基因得分离并获得全长。 2基因...
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靶向超声介导VEGF165cDNA基因治疗大鼠心肌缺血的实验研究
...2005Vol.14No.11P.854-85710（上海）为了探讨靶向超声介导VEGF165cDNA基因治疗大鼠心肌缺血的可行性。研究者将60只心肌缺血的雄性SD大鼠分为3组:超声介导基因组(采用超声破坏微泡造影剂的方法将VEGF165cDNA基因转染大鼠)、单纯基因组(尾...
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hIL－16cDNA的克隆、测序及在E.coli中的表达与纯化研究
hIL－16cDNA的克隆、测序及在E.coli中的表达与纯化研究细胞与分子免疫学杂志1999年第1期第0卷论著作者：杜勇 杜桂鑫 侯利华 汪涛 王海涛单位：杜勇 杜桂鑫 侯利华 汪涛 王海涛（军事医学科学院微生物流行病研究所，...
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中国人肌营养不良症患者蛋白基因缺失的研究
...缺失情况。方法用覆盖dystrophincD-NA全长56.3%的5个dystrophincDNA探针检测41名无亲缘关系的DMD/BMD患者。结果22名（54%）患者存在基因突变，其中DMD患者的检出率为56.7%:BMD患者的检出率为45%。21名患者存在基因缺失，占检出数的95.45%。结...
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第四节 衰老与抗衰老研究策略与展望
...表达产物，则可以根据其氨基酸顺序合成寡核苷酸探针从cDNA文库中调出cDNA克隆；利用克隆的DNA片段也可直接筛选cDNA文库；通过Northern杂交法也可得到某一克隆片段内的表达顺序。但实际情况往往是我们不知道待研究基因的表达...
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第四节 目的基因序列的来源和分离
...因组各DNA片段克隆的集合体，就称为基因组DNA文库（genomicDNAlibrary）。如果这个文库足够大，能包含该生物基因组DNA全部的序列，就是该生物完整的基因组文库，能从这文库中钓取该生物的全部基因或DNA序列。从基因组含有生物...
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童贻刚发表基因组DNA剪接技术
...物生物安全国家重点实验室童贻刚研究员发明的多外显子cDNA的直接快速克隆技术——“基因组DNA剪接”（genomicDNAsplicing,GDS）技术（http://www.plosone.org/doi/pone.0001179）。该技术克服了常规cDNA克隆方法的诸多弊端（RNA提取，cDNA制备...
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高亲和力IgE受体α链基因亚型的发现及其cDNA序列的克隆
高亲和力IgE受体α链基因亚型的发现及其cDNA序列的克隆中华微生物学和免疫学杂志2000年第4期第20卷基础免疫学作者：孙仁山 刘荣卿 叶庆佾 胡厚祥 王延江单位：孙仁山刘荣卿叶庆佾（400038重庆，第三军医大学西南医院皮...
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大鼠MHC-Ⅰ类基因cDNA的克隆
大鼠MHC-Ⅰ类基因cDNA的克隆免疫学杂志1999年第3期第15卷基础免疫学作者：夏仁品沈文律罗义刚单位：夏仁品 罗义刚华西医科大学附一院普外科成都610041；沈文律汕头大学医学院附二院汕头515031关键词：词分子克隆；MHC-Ⅰ；逆...
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地高辛标记人IL-2cDNA探针的制备及临床初步应用
地高辛标记人IL-2cDNA探针的制备及临床初步应用细胞与分子免疫学杂志1999年第1期第0卷论著作者：吴福国 韩晓琳 张向阳 邱翠娥 朱立平单位：吴福国 韩晓琳 张向阳 邱翠娥（山东济宁医学院生物化学教研室，济宁272113...
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白塞病相关自身抗原Kinectin的表达型cDNA文库筛选与鉴定
...抗体的患者血清作为“探针“免疫筛选表达型λZAP噬菌体cDNA文库并鉴定候选克隆，通过真核转录、翻译以及免疫沉淀实验分析阳性克隆表达产物的抗原性。结果文库筛选获得6个独立候选克隆，均为人Kinectin部分全长cDNA，以其中...
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cDNA微阵列对22例弥漫型胃癌基因的检测
...组织及同例相应正常胃黏膜。杂交芯片采用含14592个点的cDNA表达谱芯片。差异表达基因的筛选标准为该基因在50%以上样本中的肿瘤与正常组织荧光强度比(ratio比值)＞2或＜0.5。采用系统聚类法进行基因表达的相似性分析，标本组...
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蛋白激酶Cα-cDNA对肾癌细胞786-0多药耐药基因表达的影响
...、Westernblot方法检测基因转录和表达情况。同时检测PKCαcDNA对肾癌786-0细胞转染前后细胞中MDR相关基因MDR1、MRP1、LRP的表达变化。结果PKCα基因转染786-0细胞后，Westernblot显示转基因细胞中有PKCα的高表达；荧光倒置显微镜观察证实...
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人树突状细胞cDNA质粒文库的构建及其大规模随机测序体系的建立①
人树突状细胞cDNA质粒文库的构建及其大规模随机测序体系的建立①中国免疫学杂志1999年第6期第15卷分子与细胞免疫学作者：章卫平 曹雪涛 万 涛 朱学军 袁正隆 何 龙单位：第二军医大学免疫学教研室，上海200433关键...