5 乙型肝炎e抗體的醫學檢查
5.1 檢查名稱
5.2 分類
5.3 取材
5.4 乙型肝炎e抗體的測定原理
採用單克隆抗-HBe包被反應板,加入待查標本,同時加入基因工程重組HBeAg和多克隆抗-HBe-HRP,形成競爭結合,如待測標本中抗-HBe含量高,則抗-Hbe-HRP與HbeAg結合後形成遊離物被洗滌掉,加入TMB底物時顯色淡,反之顯色深。
5.5 試劑
包被抗-HBs反應板及HRP-抗-HBs,陰、陽性對照血清,洗滌液、底物液等。
5.6 操作方法
(l)實驗準備 從冷藏環境中取出試劑盒,在室溫下平衡30min,同時將濃縮洗滌液作1∶20稀釋。
(2)加待測標本加入待測標本每孔0.05ml,並設陽性對照2孔,陰性對照2孔空白對照1孔。
(3)加中和試劑每孔0.05ml,空白對照孔不加。
(4)加酶結合物每孔0.05ml,空白對照孔不加,充分混勻,
置37℃孵育30min。
(6)加顯色劑先加顯色劑A,每孔0.05ml;再加顯色劑B,每0.05ml;充分混勻,放置37℃避光孵育15min。
(7)終止反應每孔加終止液0.05ml,混勻。
(8)測定用酶標儀讀數,可選擇單波長450nm(以空白孔校零)
或雙波長450/630,讀取各孔OD值。
5.7 正常值
Cutoff值計算COV=陰性對照OD值×0.3。
5.8 化驗結果臨牀意義
當HBeAg轉陰,伴有HBeAb轉陽者常提示HBV複製停止或明顯減弱,傳染性並較弱,是急性乙肝病情好轉,預後良好的徵象。但pre-C區基因變異可產生HBeAg陰轉的HBV感染,HBeAb可呈陽性,病毒仍複製活躍,病變可持續進展。
5.9 附註
(1)試劑使用前應搖勻,並棄去1~2滴後垂直滴加,注意均勻用力。