3 概述
免疫複合物(immune complex,IC)或抗原抗體複合物是抗原與其對應抗體相結合的產物。在正常情況下,機體內的遊離抗原與相應抗體結合形成IC,可被機體的防禦系統清除,作爲清除異物抗原的一種方式對機體有利,但在某些情況下,體內形成的IC不能被及時清除,則可在局部沉積,通過激活補體,並在血小板、中性粒細胞等參與下,引起一系列連鎖反應而導致組織損傷,出現臨牀症狀,稱爲免疫複合物病(immunocomplex disease,ICD)。
循環免疫複合物(circulating immunocomplex,CIC)是一類在抗原量稍過剩時,形成中等大小的可溶性IC(8.8~19S),它既不能被吞噬細胞清除,又不能通過腎小球濾孔排出、可較長時間遊離於血液和其他體液中,當血管壁通透性增加時,此類IC可隨血流沉積在某些部位的毛細血管壁或嵌合在腎小球基底膜上,激活補體導致ICD的發生。檢查組織內或循環IC的存在有助於某些疾病的診斷、發病機制的研究、預後估計、病情活動觀察和療效判斷等。
CIC的檢測方法大致可分爲兩類,即抗原特異性與抗原非特異性方法。前者通過區別遊離的抗原和與抗體結合的抗原,選擇性測定含有某種特定抗原的IC。在已知由某種抗原引起的免疫病理反應的疾病中,可應用此類方法。抗原非特異方法,則不考慮形成IC抗原的性質,根據免疫球蛋白分子在結合抗原以後發生的物理學和生物學特性的改變進行檢測。但目前常用的試驗均受到複合物內Ig種類及亞類、複合物大小、抗原與抗體比例、固定補體能力等因素的影響,在臨牀實驗室應用常受到很大限制,因此很多實驗室多采用幾種不同實驗方法來進行檢測。
4 循環免疫複合物的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 循環免疫複合物的測定原理
(1)抗補體試驗:血清中如有CIC存在時,可與內源性C1結合。將被檢血清於56℃加熱30min,能破壞結合的C1,空出補體結合位置。當加入豚鼠血清(外源性C1)與指示系統(致敏羊紅細胞)時,CIC又可與外源性C1結合,使致敏羊紅細胞的溶血反應受到抑制。其結果是以50%溶血管作爲判定終點,凡測定管比對照管溶血活性低1管以上者,即爲抗補體試驗陽性,提示有CIC分子的存在。
(2)聚乙二醇(PEG)沉澱試驗:CIC分子量較大,相互結合的抗原抗體的構象發生改變,易被低濃度PEG自液相析出。PEG還可抑制CIC的解離,促進CIC進一步聚合成更大的凝聚物而被沉澱,最後利用透射比濁或散射比濁法可測出CIC的存在與含量。
(3)SPA夾心ELISA試驗:金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)可與免疫複合物中IgG的Fc段結合。將待測血清由低濃度PEG沉澱後加至SPA包被的固相載體上,再以酶標記的SPA與之反應,即可檢測檢樣中有無CIC。
(4)膠固素結合試驗:膠固素(conglutin)是牛血清中的一種正常蛋白成分,能與CIC上的補體C3活化片段C3bi結合。將其包被於固相載體上,待測血清中CIC與之結合,再加酶標記的抗人IgG,以底物溶液顯色,即可測知CIC的含量。
4.4 試劑
同抗補體、膠固素結合、PEG沉澱試驗法。
4.5 操作方法
同抗補體、膠固素結合、PEG沉澱試驗法。
4.6 正常值
血清:CIC爲陰性(抗補體試驗、膠固素結合試驗)。血清:4.3±2.0,以≥8.3爲免疫複合物陽性(PEG沉澱試驗)。血清:<28.4mg/L(SPA夾心ELISA試驗)。
4.7 化驗結果臨牀意義
免疫複合物的檢測對於判定疾病的活動性、治療效果、預後以及探討發病原因有重要意義。某些自身免疫性疾病(如全身性紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、結節性多動脈炎等)、膜增殖性腎炎、急性鏈球菌感染後腎炎、傳染病(如慢性乙型肝炎、麻風、登革熱、瘧疾等)以及腫瘤患者,血清中都可能檢出循環免疫複合物。
4.8 附註
(1)抗補體試驗:混合豚鼠血清一般1∶100稀釋後應用。-30℃保存2周後或夏季取血,豚鼠補體活性會有所下降,用前可先滴定。選取0.1ml可引起50%溶血的補體稀釋度;豚鼠血清切忌反覆凍融,已融化未用完者應棄去;被檢血清樣本應新鮮,無細菌污染與溶血。如當日不檢測,應置於-30℃凍存;本法只能檢出與補體結合的CIC,抗補體的任何因素均能干擾本試驗結果。
(2)PEG沉澱試驗:低密度脂蛋白可引起濁度增加,故應空腹取血;高丙種球蛋白血癥或血脂含量過高,以及血清標本反覆凍融,均易造成假陽性;此法快速、簡便,但特異性較差,僅適於血清標本的篩查。
(3)SPA夾心ELISA試驗:熱聚合人IgG應分裝貯存於-20℃,不宜反覆凍融,否則易解聚。加入SPA至最終濃度5.0g/L,可使熱聚合人IgG穩定;PEG濃度影響CIC沉澱的量,須嚴格控制。
(4)膠固素結合試驗:不能及時檢測的標本應放-30℃保存,避免反覆凍融;每次實驗應設陰性和陽性對照,並按下列公式校正待檢血清(包括調查正常人血清吸光度均值的血清和臨牀標本)的吸光度,校正的待檢血清吸光度=待檢血清吸光度/陽性參考血清吸光度,本法只能檢出結合補體的大分子IgG類免疫複合物。