3 概述
脂肪酶（LPS）主要來源於胰腺，爲一組專一性不高的酶，能水解多種含長鏈（8～18碳鏈）脂肪酸的甘油三酯，兩端（α位）的脂肪酸較易被水解生成甘油二酯，進一步又被水解爲β甘油單酯。β甘油單酯很難被脂肪酶水解，常需先進一步變構爲α甘油單酯。所以只有一小部分甘油三酯可以完全水解產生甘油。
此酶只作用於油和水的界面，反應速度和底物乳劑中顆粒大小有關。顆粒愈小，接觸表面積大，反應速度快，而乳劑中底物濃度高低關係較小。因此，配製一個均勻而能長期保存底物乳劑是方法中一個很重要而又困難的問題，現在多用橄欖油乳劑來配製底物。測定方法大致有滴定法、比濁法。
4 血清脂肪酶的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 取材
4.4 血清脂肪酶的測定原理
（1）滴定法：以橄欖油製成的乳劑爲底物，血清脂肪酶催化其酯鍵水解，生成單酸甘油酯及脂肪酸，用標準氫氧化鈉溶液滴定脂肪酸，根據氫氧化鈉用量計算LPS的活力單位。
（2）比濁法：甘油三酯與水製成的乳膠，因其膠束對入射光的吸收及散射而具有乳濁性狀。膠束中的甘油三酯在脂肪酶的作用下水解，使膠束分裂，濁度或光散射因而減低。減低的速率與脂肪酶活力有關。
4.5 試劑
（1）滴定法：
①20%（V/V）橄欖油乳劑：稱取格替樹膠1.5g，置研鉢中，研成細粒後，加入2g/L苯甲酸鈉溶液5ml，繼續研磨成糊狀。然後再用2g/L苯甲酸鈉溶液75ml，分次洗滌研鉢，一併倒入組織搗碎機內，加入純橄欖油20ml，初以8000轉/min攪拌3min，繼以高速（12000轉/min）攪拌5min，即成乳白色的橄欖油乳劑。放冰箱保存。
②0.067mol/L，pH8.0磷酸鹽緩衝液：稱取磷酸二氫鉀9.08g，用蒸餾水溶解並稀釋至1L，此爲甲液。
稱取無水磷酸氫二鈉9.47g，用蒸餾水溶解並稀釋至1L，此爲乙液。
取甲液5.3ml與乙液94.7ml混合，即爲0.067mol/L pH8.0磷酸鹽緩衝液。
④0.05mol/L氫氧化鈉。
（2）比濁法：
①純化橄欖油：稱取層析純氧化鋁（70～325篩孔）10g，置於2mm×15cm層析柱中，使呈疏鬆及表面平整狀態，緩緩加入AR級橄欖油18ml，用橡皮沖洗球加壓，層析除去遊離脂肪酸，得到無色透明的橄欖油約10ml，氧化鋁轉成黃色。
②橄欖油乙醇液：稱取已處理的橄欖油2g，溶於無水乙醇中，加無水乙醇至200ml；
③Tris緩衝液（pH8.8）：稱取Tris 3g，去氧膽膽酸納6g，溶於蒸餾水中，稀釋到1L，用濃鹽酸調pH至8.8；
④0.17μmol/L橄欖油乳劑：取500mlTris緩衝液，放入燒杯內，磁力攪拌器上，開動攪拌器，緩緩加入7.5ml橄欖油乙醇液（吸管尖端應插入液麪以下），使呈均勻乳油液，冰箱保存。
4.6 操作方法
（1）滴定法：按表1進行。
用0.05mol/L氫氧化鈉滴定空白管和測定管，至呈持久的淺灰藍色爲止，記錄滴定用去的氫氧化鈉毫升數。
（2）比濁法：
①於試管內加入4ml橄欖油乳劑，37℃預溫5min，加入0.05ml血清，立即顛倒混合5次（切勿用力振搖!），迅速用分光光度計比濁，以Tris緩衝液調零點，在400nm波長讀取吸光度爲A1。
②將此管置於37℃水浴保溫10min，然後同上讀取吸光度爲A2。
③如果酶活力很高，在保溫期間，底物全部變清，則應將待測血清用Tris緩衝液作適當稀釋後重新操作。
④標準曲線製作，取試管4只，分別加入橄欖油乳劑1.0、2.0、3.0及4.0ml，然後用Tris緩衝液補充到4.0ml，相當於甘油三酯濃度分別爲0.17、0.34、0.51及0.68μmol，同上比濁，繪製標準曲線。
4.7 正常值
（1）滴定法：酶促反應4h爲0.06～0.89U/ml，酶促反應16～24h爲0.2～1.5U/ml。
（2）比濁法：呈正偏態分佈，最低爲OU，單側95%上限爲7.9U。
4.8 化驗結果臨牀意義
胰腺是人體LPS最主要來源。血清LPS增高常見於急性胰腺炎及胰腺癌，偶見於慢性胰腺炎。急性胰腺炎時，血清澱粉酶增加的時間較短，而血清LPS活性上升可持續10～15天。腮腺炎未累及胰腺時，LPS通常在正常範圍。此外，總膽管結石或癌、腸梗阻、十二指腸穿孔等有時亦可增高。
4.9 附註
（1）滴定法：
①原法加溫24h，但後來發現在後16h內底物水解較少，而且操作時間太長，不能滿足臨牀要求，故改爲4h。
②橄欖油乳劑質量的優劣直接影響脂肪酶測定結果的準確性。乳劑乳化顆粒的大小及血清中脂肪酶是否能與乳化顆粒充分接觸是重要因素。因此，每批製備的乳劑，其正常範圍也略有出入，需用正常血清測試。
（2）比濁法：
①市售橄欖油必須用氧化鋁吸附處理，去除遊離脂肪酸。使用未處理的橄欖油測出的脂肪酶活力只相當於處理過橄欖油測出結果的65%左右。
②約有5%～7%的正常人血清與底物保溫後的吸光度比保溫前略有增加，因而成負值。這可能由於血清中某些異常蛋白質發生沉澱所致，例如含類風溼因子的標本常有此情況。遇有此種血清，可在血清中加入聚乙二醇6000，使終濃度達55g/L，預孵10min，使干擾物（如IgM）沉澱或解離，然後再用經此處理的標本操作即可。