4 尿硒的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 化驗取材
4.4 尿硒的測定原理
石墨爐原子吸收光譜法:尿樣加基體改進劑後,直接用石墨爐原子吸收光譜法測定硒濃度。
4.5 試劑
(2)硒空心陰極燈。
(3)實驗用水:去離子水(比電阻大於500kΩ·cm的水)或經全玻璃蒸餾器重蒸餾的水或經石英亞沸蒸餾器重蒸餾的水。
(4)硝酸:P20=1.42g/ml,高純。
(5)基體改進劑:稱4.0g磷酸二氫銨(NH4H2PO4、光譜純),6.0g抗壞血酸,加入溶解並稀釋至100ml,搖勻,貯存於聚乙烯塑料瓶中。
(6)鉬溶液,100g/L:稱取18.4g鉬酸銨[(NH4)6Mo7TO24·4H2O]溶於約50ml水中,加8ml氨水,用水稀釋至100ml。
(7)硒標準溶液:稱取0.1000g硒(光譜純),加10ml水和1ml硝酸,加熱溶解,移入100ml容量瓶中,用水稀釋至刻度,此溶液1ml約含1.0mg硒,臨用前,以基體改進劑逐級稀釋成1m1約含0.2μg硒標準使用液。
4.6 操作方法
(1)採樣、運輸和保存:用聚乙烯塑料瓶收集一次尿樣約100ml,儘快測量比重後,取5ml尿置於5ml聚乙烯塑料試管中,加0.05ml硝酸、混勻。室溫下儘快運輸,夏季運輸最好冷藏。冰箱(4℃)中可保存兩週。
(2)樣品處理:樣品放置室溫後,充分搖勻,吸取0.20ml置於塑料離心管中,加入0.20ml基體改進劑,混勻。
(3)標準曲線:
①儀器操作條件:PE儀器可參照下列操作條件,將原子吸收分光光度計調整到最佳測定狀態。
波長:283.3nm
燈電流:7.5mA
通帶:1.3nm
進樣量:10μl;
載氣(Ar)流速:150ml/min,原子化時停氣
乾燥溫度/時間:45~70℃/40s
灰化溫度/時間:450℃/30s
原子化溫度/時間:1950℃/7s
清洗溫度/時間:2050℃/3s
石墨管處理:在普通石墨管中加入100g/L鉬溶液20μl,在載氣流速爲100ml/min,溫度爲45℃~70℃下乾燥50s,在450℃灰化30s,1950℃原子化7s重複操作10次,經塗鉬處理後的石墨管內壁底部呈灰白色。
②標準曲線的繪製:取6個塑料離心管,分別加入硒標準使用液0,0.03,0.06,0.09,0.12,0.15ml(硒濃度相當於0,30,60,90,120,150μg/L)同時取0.20ml正常人混合尿,加0.20ml基體改進劑爲對照管及空白管。各管混勻後,進樣10μl,以標準管的硒濃度爲橫座標,測得的吸光度值減去對照管的吸光度值後作爲縱座標,繪製標準曲線。
(4)樣品測定:按儀器操作條件,測定樣品管的吸光度值,減去空白管吸光度值後,由標準曲線查得稀釋尿樣中硒的濃度。
4.7 正常值
0.13~1.27μmol/L (10~100μg/L)。
4.8 化驗結果臨牀意義
(1)升高:硒中毒。
(2)降低:克山病等。
4.9 附註
(2)採得的尿樣如不能及時分析,要加酸在冰箱(4℃)中保存,保存期不得超過14天,分析時必須徹底搖勻後取樣。
(3)尿樣含硒量超出測定範圍,可將尿樣用模擬尿進行適度的稀釋。
(4)所用的儀器和石墨管的性能及其使用的次數都對測定有影響,應將儀器操作條件調節到最佳狀態。未經塗鉬處理的普通石墨管亦適用,原子化溫度爲2000℃,7s。