3 概述
甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)爲一直徑爲27~32nm的二十面體立體對稱圓球形顆粒,無包膜,核心爲單鏈正股RNA。HAV屬小RNA病毒科嗜肝病毒屬(hepatovirus)或嗜肝RNA病毒屬(heparnavirus)。HAV主要通過手-口途徑傳播,潛伏期15~50天,平均28天。病毒常在患者血清ALT升高前的5~6天就存在於患者的血液和糞便中。發病2~3周後,隨血清中特異抗體的產生,血清和糞便的傳染性就逐漸消失。HAV的實驗室診斷可進行抗體檢測。臨牀上用的最多的是用ELISA方法查抗-HAV抗體。
5 甲型肝炎抗體的醫學檢查
5.1 檢查名稱
5.2 分類
5.3 化驗取材
5.4 甲型肝炎抗體的測定原理
採用競爭ELISA法,即在板上包被HAVAg,然後同時加入待測血清和酶標抗-HAV,這樣,待測血清中如有抗-HAV抗體,則與加入的酶標抗-HAV競爭與包被的HAVAg結合,加底物後作用後顯色就淺或無色,爲陽性。如待測血清中無抗-HAV抗體,則酶標抗-HAV就與包被的HAVAg結合,加底物作用後則顯深色,爲陰性。測得的光密度值與抗-AHV含量成反比。
RIA方法原理基本同上,亦用競爭法。
5.5 試劑
國內有商品化試劑盒供應,內含抗μ鏈包被的反應板(條),HAV應用液,抗HAV-HRP標記物,以及抗HAV IgM陰、陽性對照血清,樣品稀釋液,洗滌液,底物液及終止液等試劑。
5.6 操作方法
應按試劑盒介紹進行檢測。一般試劑盒分兩類。
(1)三步法:本法操作步驟較多,檢測費時,有逐漸被二步法取代的趨勢。
①加稀釋樣品:在包被反應板(條)孔內加入1∶1000倍稀釋樣品100μl,每次實驗有陰、陽性對照,37℃保溫2h,洗板3次。
②加HAV:各孔加HAV 100μl,37℃ 1h後移至4℃過夜,洗板3次。
③加抗HAV-HRP:各孔加抗HAV-HRP 100μl,37℃保溫3h,洗板4次。
④顯色:各孔加入底物液100μl,37℃保溫15min。
⑤終止反應:各孔加入終止液50μl。
⑥結果判讀。
比色法:在酶標儀上以試劑空白校零點,測各孔在492nm光密度值,當大於或等於4爲陽性,低於4爲陰性。
(2)二步法操作:按上法加稀釋樣品保溫、洗滌後,同時各孔加HAV 50μl及抗HAV-HRP 50μl,混勻後37℃保溫1h,洗板4次,以後同上法顯色和判讀結果。
5.7 正常值
陰性。
5.8 化驗結果臨牀意義
抗-HAV總抗體,主要是IgG抗體。它產生於初期感染的早期,在發病時,血清中的滴度已相當高,2~3個月達高峯。抗-HAV IgG可維持很長時間,終生可檢測到。抗-HAV IgG是保護性抗體,獲得後一般不會再感染。出現抗-HAV IgG本身並不能診斷爲甲肝,同時存在IgM類抗體才能做出診斷。出現抗-HAV IgG而無抗-HAV IgM是既往感染HAV並獲得免疫力的一個標誌。抗-HAV IgG檢測可用於對甲肝的流行病調查和接種疫苗效果的觀察。母親感染過HAV的新生兒亦可檢測到抗-HAV IgG達8個月。